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穿心莲内酯联合长春新碱调控肾母细胞瘤细胞生物学特性的实
验研究的开题报告
一、研究背景与意义
肾母细胞瘤(Wilms瘤)是一种儿童常见的原发性肿瘤,其发
生率占儿童恶性肿瘤的10%左右。根据病理学特征,肾母细
胞瘤可分为不同的亚型,如常见型、胞外型、上皮样型等。当
前,主要的治疗方法是手术切除和化疗,但对于高危患儿和复
发患者,化疗的效果十分有限。因此,寻找新型的治疗方法对
于肾母细胞瘤的治疗具有重要的意义。
穿心莲内酯是一种来自于四君子汤中的中草药提取物,具有多
种生物活性,包括抗炎、抗氧化、抗肿瘤等作用。穿心莲内酯
能够抑制肿瘤细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡,并且具有类似化
疗药物的作用。长春新碱是目前常用的化疗药物之一,其抑制
肿瘤细胞增殖的作用已经得到了临床的验证。因此,我们考虑
将穿心莲内酯和长春新碱联合应用,进一步探究二者联合对肾
母细胞瘤细胞生物学特性的影响。
二、研究方法
1、实验细胞种类:人肾母细胞瘤细胞系SK-NEP-1。
2、实验药物:穿心莲内酯、长春新碱。
3、实验组设计:
-对照组:不加入药物的细胞培养基。
-穿心莲内酯组:加入一定剂量(例如10μM)的穿心莲内酯。
-长春新碱组:加入一定剂量(例如5μM)的长春新碱。
-联合组:加入一定剂量的穿心莲内酯和长春新碱。
4、实验指标:
-细胞增殖能力:MTT法检测药物对细胞增殖的影响。
-细胞凋亡率:Annexin-V/PI双染法检测药物对细胞凋亡的影
响。
-细胞周期:流式细胞术检测药物对细胞周期的影响。
-与细胞增殖相关的蛋白表达:Westernblot方法检测药物对
CyclinD1、CDK4等蛋白的影响。
三、研究计划
1、实验时间安排:
-预备工作:确定实验细胞的培养条件,国内外已有文献的查
阅等。(1个月)
-细胞处理及指标检测:细胞处理、各实验条件下的MTT、
Annexin-V/PI、流式细胞术等指标检测。(3个月)
-数据分析及结果展示:实验结果汇总分析,绘制实验结果的
图表。(1个月)
-论文写作与提交:根据实验结果撰写完整实验报告及SCI论
文,准备提交。(2个月)
2、实验预算:
-药品费用:3个月穿心莲内酯和长春新碱的费用约为3000元。
-实验器材费用:荧光显微镜、细胞培养器、流式细胞仪等,
总计约为50,000元。
-实验人员工资:实验员和技术员合计3人,每人工资6000元
/月,共计36,000元。
-其他费用:实验室材料(如培养基、试剂盒等)和场地费用
等,约为8000元。
总预算为约98,000元。
四、研究进展
截至目前,实验组已完成了细胞的培养和实验药物穿心莲内酯
和长春新碱的初步筛选等预备工作。下一步将进入到细胞处理
及指标检测的实验阶段。预计在今年年底前完成实验并提交研
究成果。
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