吉西他滨联合厄洛替尼通过抑制突变型p53蛋白表达促进胰腺癌细胞凋亡.pdfVIP

吉西他滨联合厄洛替尼通过抑制突变型p53蛋白表达促进胰

腺癌细胞凋亡

黄欣昊;柳千帆;宋春灼;朱海涛

【期刊名称】《《贵阳医学院学报》》

【年(卷),期】2019(044)010

【总页数】6页(P1173-1178)

【关键词】胰腺肿瘤;细胞凋亡;厄洛替尼;吉西他滨;联合用药;p53蛋白

【作者】黄欣昊;柳千帆;宋春灼;朱海涛

【作者单位】贵州医科大学临床医学院贵州贵阳550025;贵州医科大学附院临床

研究中心贵州贵阳550004;贵州医科大学附院肝胆外科贵州贵阳550004

【正文语种】中文

【中图分类】R735.9

胰腺癌是一种化学治疗效果差、对绝大多数化疗药物都不敏感的难治性恶性肿瘤

[1-3]。与近年来大多数肿瘤生存率稳定增长趋势相反，胰腺癌患者的死亡率逐年

增加，且晚期胰腺癌患者5年生存率仅达3%[4-5]。1996年，吉西他滨

(gemcitabine，GEM)被美国食品药品监督管理局批准用于胰腺癌治疗[6]，至今

依然是胰腺癌治疗的一线化学治疗药，但对患者的生存期及总生存率并没有明显的

提高[7-8]；厄洛替尼(erlotinb，ERL)是目前临床上唯一与GEM联用后对患者有

生存优势的分子靶向药物[9-11]。本课题前期研究结果表明，GEM联合ERL可以

改善患人胰腺癌肿瘤裸鼠的生存状态，并延长其中位生存期[12]。为进一步探究

GEM与ERL合用治疗胰腺癌的分子机制，本研究通过双染流式细胞技术观察不同

药物处理后人胰腺癌细胞PANC-1细胞的凋亡情况，运用实时荧光定量PCR法观

察p53基因的表达，同时通过WesternBlot法观察p53及其信号通路下游重要

生物分子BAX蛋白表达水平，以探究GEM联合ERL治疗胰腺癌可能的生物分子

机制，为临床用药及新药研发提供科学依据。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1细胞株、主要药品和试剂人胰腺癌细胞PANC-1由中国科学院干细胞库提

供，GEM、ERL购自美国SelleckChemicals公司，DMEM高糖培养基、含

0.02%EDTA的0.25%胰酶溶液购自美国GIBCO公司，胎牛血清购自以色列

BiologicalIndustries公司，SDS、TEMED、Tris-Base、甘油、甘氨酸、

Tween-20、RIPA、PMSF蛋白酶抑制剂均购自北京索莱宝公司，兔抗人抗体p53

蛋白、BAX抗体购自武汉三鹰公司，二抗(羊抗兔)购自艾菲公司，一抗稀释液购自

碧云天公司，ECL发光液购自美国Millipore公司，Marker购自美国Therom公

司，PVDF蛋白杂交膜购自美国Millipore公司，Annexin-VAPC/7AAD流式凋

亡试剂盒购自中国联科公司，TRIzol购自美国BD公司，氯仿、异丙醇、无水乙

醇购自上海生工生物工程有限公司，逆转录试剂盒及实时荧光PCR试剂盒购自日

本TaKaRa公司。p53、GAPDH引物购自南京金斯瑞生物技术公司(p53:上游引

物：CAGCACATGACGGAGGTTGT，下游引物：TCATCCAAATACTCCACACGC；

GAPDH上游引物：ACAACTTTGGTATCGTGGAAGG，下游引物：

GCCATCACGCCACAGTTTC)。

1.1.2主要仪器OptimaXPN-80超高速离心机购自美国BECKMAN公司，371

型细胞培养箱购自美国Thermo公司，AB2-4S1型生物安全柜购自新加坡艺思高

科技公司，Mini-Pharma型垂直电泳仪购自美国Bio-Rad公司，3300型成像系

统的影像分析器购自中国勤翔公司，CFX96型实时荧光定量PCR仪购自美国Bio-

Rad公司，NanoDrop2000核酸定量仪购自美国Thermo