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丙二醛含量测定

植物组织或器官中丙二醛含量的测定

一、实验目的

二、实验原理：

三、实验仪器：紫外可见分光光度计离心机

四、实验步骤：

●1MDA的提取称2g叶片，加入10％三氯乙酸(TCA)2ml及少量

石英砂，研磨；进一步加入8mlTCA充分研磨，接着把匀浆液以

4000r／min离心10min，其上清液即为MDA提取液。

●2MDA显色反应及测定取2mlMDA提取液（对照组取2ml蒸

馏水），在加2ml0.6％TBA混匀，在试管上加棉塞，置沸水中加热

15min，迅速拿出水浴锅冷却，以4000r／min离心15min，于波长

532nm和450nm下测定OD值。

五、结果计算

●以测得的OD532减去OD600的非特异吸收值，分别计算衰老

和对照组的值。

MDA浓度(μmol/L)=6.45OD532-0.56OD450

D450、D532分别代表450nm、532nm波长下的光密度值。

六、注意事项：

●0.1-0.5％的三氯乙酸对MDA—TBA反应较合适，若高于此浓度，

其反应液的非专一性吸收偏高；

●MDA-TBA显色反应的加热时间，最好控制沸水浴10-15min之

间。时间太短或太长均会引起532nm下的光吸收值下降；

●如待测液浑浊，可适当增加离心力及时间。

●低浓度的铁离子能增强MDA与TBA的显色反应，当植物组织中

铁离子浓度过低时应补充Fe3+（最终浓度为0.5nmol·-1L）

●可溶性糖与TBA显色反应的产物在532nm也有吸收（最大吸

收在450nm），当植物处于干旱、高温、低温等逆境时可溶性糖含量

会增高，必要时要排除可溶性糖的干扰。

丙二醛(MDA)含量的测定

①测定步骤

称取剪碎的试材1g，加入2ml10%三氯乙酸(TCA)和少量石英砂，

研磨至匀浆，再加8mlTCA进一步研磨，匀浆在4000r/min离心10

分钟，上清液为样品提取液。吸取离心的上清液2ml(对照加2ml蒸馏

水)，加入2ml0.6%硫代巴比妥酸溶液，混匀物于沸水浴上反应15min，

迅速冷却后再离心。取上清液测定532、600和450nm波长下的吸光

度。

②计算(3-6)式中：C—MDA的浓度；A450，A532和A600—分

别代表450、532和600nm波长下的吸光度值。

丙二醛(MDA)含量的测定

丙二醛(MDA)是常用的膜脂过氧化指标，在酸性和高温度条件下，

可以与硫代巴比妥酸(TBA)反应生成红棕色的三甲川(3，5，5—三甲基

恶唑-2，4。二酮)，其最大吸收波长在532nm。但是测定植物组织中

MDA时受多种物质的干扰，其中最主要的是可溶性糖，糖与TBA显

色反应产物的最大吸收波长在450nm，但532nm处也有吸收。

关键词：丙二醛含量测定氧化作用MDA膜脂过氧化硫代巴比妥酸

TBATBA显色反应

植物器官衰老或在逆境下遭受伤害，往往发生膜脂过氧化作用，

丙二醛(MDA)是膜脂过氧化的最终分解产物，其含量可以反映植物遭

受逆境伤害的程度。MDA从膜上产生的位置释放出后，可以与蛋白质、

核酸反应，从而丧失功能，还可使纤维素分子间的桥键松驰，或抑制

蛋白质的合成。因此，MDA的积累可能对膜和细胞造成一定的伤害。

[原理]丙二醛(MDA)是常用的膜脂