DB22T 2788-2017 猫泛白细胞减少症诊断 实时荧光PCR法　.docxVIP

ICS11.220B41

备案号：59152-2018DB22吉林省地方标准

DB22/T2788—2017

猫泛白细胞减少症诊断实时荧光PCR法

ThediagnosticofFelinepanleukopeniavirusReal-timePCRmethod

2017-12-11发布2018-04-01实施

吉林省质量技术监督局发布

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DB22/T2788—2017

前言

本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2015给出的规则起草。本标准由吉林省畜牧业管理局提出并归口。

本标准起草单位：吉林省畜牧兽医科学研究院、吉林农业大学、吉林省动物疫病预防控制中心。

本标准主要起草人：程荣华、呼延含蓉、王开、郭衍冰、王楠、丁世杰、邵洪泽、于钦磊、白翠、李昱洁、陆伟、何浩、刘沂霖、赵欣、肖玉海、王辉。

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DB22/T2788—2017

猫泛白细胞减少症诊断实时荧光PCR法

1范围

本标准规定了猫泛白细胞减少症实时荧光PCR方法的缩略语、材料、操作步骤和结果判定。本标准适用于猫泛白细胞减少症的实验室诊断。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3缩略语

下列缩略语适用于本文件。

PCR：聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）Ct：循环阈值（Cyclethreshold）

DNA：脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleicacid）

4材料

4.1仪器设备

4.1.1分析天平，感量0.1mg。

4.1.2高速冷冻离心机，12000r/min以上。

4.1.3荧光定量PCR扩增仪。

4.1.4冰箱，2℃~8℃和-20℃两种。

4.1.5可调移液器，最大量程为10μL，200μL，1000μL。4.1.6恒温水浴锅，控温范围为室温至100℃。

4.1.7高压蒸汽灭菌器。

4.1.8干热箱。

4.2器械与耗材

4.2.1组织匀浆器或研钵。

4.2.2医用剪刀。

4.2.3医用镊子。

4.2.41.5mL离心管。

4.2.515mL离心管。

4.2.650mL离心管。

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4.2.71000mL量筒。

4.2.81000mL容量瓶。

4.2.9PCR八联排管。

4.2.10吸头，10μL，200μL，1000μL。

4.2.11医用棉签。4.3试剂

除有特殊说明外，所有实验用试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T6682中一级水的要求。4.3.10.02mmol/LPBS，见附录A。

4.3.2基因组DNA提取试剂盒。

4.3.3SYBRPremixExTaqII（TliRNaseHPlus）（2×)。

4.3.4灭菌双蒸水。4.4引物

上游引物F：5-AATGCTTGGGGAGTTTGGTTT-3。

下游引物R：5-TTTAGTTGGTGGCTGAGTAGCAGA-3。

5操作步骤

5.1采样器具前处理

5.1.1组织匀浆器或研钵（4.2.1）、医用剪刀（4.2.2）、镊子（4.2.3）经160℃干热灭菌2h。

5.1.2离心管经121℃±2℃高压蒸汽灭菌15min。

5.2样品的采集和处理

5.2.1用拭子（4.2.11）采集猫眼周分泌物、鼻液、粪便，采集样品的拭子用少量PBS（4.3.1）浸

润后，3000r/min离心15min，取上清液待检。

5.2.2采集病死猫肠道、肝、脾等组织器官，加等体积PBS（4.3.1）研磨匀浆，3000r/min离心15min，取上清液待检。

5.3DNA提取

按照基因组DNA提取试剂盒说明书要求操作，提取的基因组DNA应迅速进行荧光定量PCR扩增，或置于-20℃冰箱（4.1.4）备用。

5.4反应体系

5.4.1实时荧光PCR扩增反应体系见表1。