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张明刚3090101659

简介鼠源单克隆抗体

众所周知，抗体是于二十世纪三十年代才在世界上通用的词，本质是与相应抗原特

异结合的具有免疫功能的球蛋白！而能与抗体特异结合的物质叫做抗原！

一、鼠源单克隆抗体的产生历史

1、需要证明每种B细胞只能产生单一的抗体

2、提取并体外培养骨髓瘤细胞

3、解决B细胞与骨髓瘤细胞融合的问题

4、如何筛选融合成功的骨髓杂交瘤细胞

5、骨髓杂交瘤细胞的体外或体内培养

早在1847年，BenceJones在骨髓瘤患者尿中发现了本周氏蛋白，后被证明是均一

的抗体轻链，而生物体产生抗体的基本特点是多样性及不均质性,因而在20世纪50

年代之前对这一现象一直没有很合理的解释。1957年Burnet提出了抗体产生的细胞

系选择学说，认为每个B细胞只能产生一种抗体，且它以独特的受体形式在细胞表

面，只与特定的抗原决定簇结合。后被证明是对的。

后来1965年Sachs等人成功的诱导出骨髓瘤细胞，并且在体外培养成功。

1957年冈田等人用高浓度的仙台病毒是小鼠细胞发生融合。1975年Kao和Chayluk

提出用聚乙二醇作为融合剂，80年代发现啦电融合技术，解决啦细胞融合问题。

因为细胞融合存在存在A-A、B-B、A-B三中融合方式。因而如何筛选A-B方式

便极为重要。1964年Littlefiled创建了融合细胞的筛选方法。利用两种不同生化缺

陷的双亲进行杂交，借助于含有次黄嘌呤、甲氨蝶呤、胸腺嘧啶核苷的HAT选择性

培养基选择出了所需杂交细胞。

在这些理论基础上Kohler和Milstein发表了《分泌特异性抗体融合细胞的持续培

养》这篇文章，提出用仙台病毒使小鼠骨髓瘤细胞和经羊红细胞免疫的小鼠脾细胞

融合产生的杂交瘤细胞，既具有骨髓瘤细胞永生的特性和脾细胞产生抗羊红细胞抗

体的能力。这一工作为后来制备单抗提供了依据，也标志着单克隆抗体的产生！

二、鼠源单克隆抗体的制备

1、融合前的准备工作

2、融合

3、融合后的管理

（一）融合前的准备工作

（1）准备工作包括组织培养材料的制备、组织培养用水（去离子水）、培养基

（高糖DEME、RPMI-1640两种培养基）、血清（常用胎牛血清）、抗生素

（2）小鼠免疫

用特定的抗原来刺激小鼠，第一次免疫往往产生多价的低亲和力的IgM,随着多次

免疫产生了主要为二价的IgG.。一般一次注射10~20微克的抗原即可，也可以到50微

克，但很少一次注射超过200微克。

一般选择6周龄的雌性Balb/c小鼠免疫，因为融合所用的骨髓瘤细胞多来自于该

品系，到受检的小鼠中出现所需抗体是才开始融合。

常用的免疫途径为腹腔、皮下淋巴样器官及静脉，也可以经皮下或肌肉注射。而

腹腔是最常用的免疫途径。该方式可以注射更多抗原，且抗原不会立即进入血液循环，

适于颗粒性抗原。

载体一般用白蛋白、钥孔戚蓝蛋白等大分子蛋白外，任何一种小的、惰性的、无毒的、

能固定抗原并且是抗原缓慢释放的物质都可作为载体。

（二）融合：

1、细胞制备

（

1）小鼠骨髓瘤细胞

通过向小鼠腹腔中注射矿物油可诱生骨髓瘤，1972年Potter第一次从Blab/c

小鼠中分离出骨髓瘤株MOPC，尤其衍生出的骨髓瘤细胞成为常用的融合亲代细胞系。

(2)骨髓瘤细胞的复苏

在融合前一周将骨髓瘤细胞从液氮中取出，放入37~39度水中，融化后取出细胞，

洗涤出去冷冻液，放入胎牛血清DMEM或RPMI-1640完全培养液中。将细胞浓度调整

在1~2*10^5/ml,使细胞活力大于90%，

(3)脾细胞的分离

骨髓瘤细胞与该细胞品系密切的细胞融合时，成活的杂交瘤细胞才能明显增加，

因此一般取相同品系的细胞进行融合。末次免疫3~5个小时后从脾脏中分离出淋巴细胞，

该操做应在无菌环境中。

2、细胞融