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实验室常用载体介绍;载体构建的根本原理;TOPO异构酶;;;Gateway?技术基于清楚了解的λ噬菌体位点特异重组系统(attB+attP;attL+attR)。BP反响是DNA片段或者包含attB位点的表达克隆与包含attP位点的供载体〔donorvector〕之间进行的反响。BP反响产生入门克隆。
LR反响是含attL位点的入门克隆和包含attR位点的目的载体之间的重组反响。LR反响产生表达克隆。表达克隆包含目的基因和目的载体特异的启动子或者一些元件。;1.创立入门克隆,通过PCR或传统的克隆方法将目的基因克隆进入门载体。;GatewayattB引物;酶切连接载体;;Gateway技术载体;;;pGWB401
pGWB501;;;可能都要做融合蛋白了,与gfp或者his标签,这样以后就可以做WESTERN了。这边他们的超表达都是做的融合蛋白,不过要事先确定融合基因放在5‘还是3’,免得影响其功能。如果不确定就两种同时做。
;RNAi;启动子;启动子〔截短策略〕;棉花自己的启动子???;诱导表达;loxP34bpCREgene
GlucocorticoidGRintron
EGFP
;;效率低的问题:;邓锋林负责载体的保管
谭家福负责相关酶的管理
每个人只给划平板;转基因过程中的本卷须知
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