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第63页,共70页,星期六,2024年,5月第64页,共70页,星期六,2024年,5月第65页,共70页,星期六,2024年,5月第66页,共70页,星期六,2024年,5月第67页,共70页,星期六,2024年,5月第68页,共70页,星期六,2024年,5月第69页,共70页,星期六,2024年,5月*感谢大家观看第70页,共70页,星期六,2024年,5月2.DNA结合蛋白主要转录激活结构域转录激活结构域(transcriptionactivationdomains)一般由20-100个氨基酸残基组成。如GAL4分子中有2个这种结构域,分别位于多肽链的第147-196位和第768-881位;GCN4的转录激活结构域位于多肽链的第106-125位。a.酸性α-螺旋(acidicα-helix)
该结构域含有由酸性氨基酸残基组成的保守序列,多呈带负电荷的亲脂性α-螺旋,包含这种结构域的转录因子有GAL4、GCN4、糖皮质激素受体和AP-1/Jun等。增加激活区的负电荷数能提高激活转录的水平。可能是通过非特异性的相互作用与转录起始复合物上的TFIID等因子结合生成稳定的转录复合物而促进转录。第31页,共70页,星期六,2024年,5月b.谷氨酰胺丰富区(glutamine-richdomain)
SP1的N末端含有2个主要的转录激活区,氨基酸组成中有25%的谷氨酰胺,很少有带电荷的氨基酸残基。酵母的HAP1、HAP2和GAL2及哺乳动物的OCT-1、OCT-2、Jun、AP2和SRF也含有这种结构域。C.脯氨酸丰富区(proline-richdomain)
CTF家族(包括CTF-1、CTF-2、CTF-3)的C末端与其转录激活功能有关,含有20%-30%的脯氨酸残基。第32页,共70页,星期六,2024年,5月3.与已知DNA序列相结合的反式作用因子a.CAAT盒激活因子CTF(CAATboxtranscriptionfactor)家族是能识别CAAT盒的一组转录因子。这一组因子是由单个基因通过可变换的剪接而形成的一组mRNA产生的。CTF家族成员对各种CAAT盒有相同的亲和力。另一组CAAT区结合蛋白被称为CP,它们是从人的HeLa细胞中得到的。CP1具有对α-球蛋白和腺病毒晚期基因启动子CAAT区的高亲和力,CP2具有对γ-血纤蛋白原基因启动子CAAT区的高亲和力,而CP3能与腺病毒DNA相结合。CP族蛋白主要以异源多聚体的形式存在。第33页,共70页,星期六,2024年,5月除了CTF和CP族蛋白能与CAAT区结合外,科学家还从小鼠肝细胞里发现两个CAAT区结合蛋白。CBP对序列GCAAT有较强的亲和力,而ACF则对卵清蛋白基因启动子区的CCAAT有高亲和力。因此,在启动区发现某个保守序列,并不等于同一个蛋白因子参与了该基因的调控。对9个哺乳动物类β-球蛋白基因和1个人α-球蛋白基因5调控区的研究发现,几乎每个基因都具有CCAAT(-80位左右)区和TATA(-30左右)区。?第34页,共70页,星期六,2024年,5月第35页,共70页,星期六,2024年,5月b.TATA区结合蛋白RNA聚合酶II需要与其他转录因子结合,才能顺利起始转录。通常把辅助因子需要量最小的启动子称为一般性启动子(genericpromoter),具有组成型表达特性,这些启动子上游调控区及所需转录因子在绝大多数甚至全部基因中都是高度保守的。第36页,共70页,星期六,2024年,5月TBP结合于DNA的小沟。TBP与DNA的结合在体外实验中保护了大约一圈双螺旋DNA免受核酸酶的降解,其覆盖的位置处于-37~-25。TAFs的加入延伸了对DNA的覆盖,整个TFIID复合物可覆盖-45~-10区域。第37页,共70页,星期六,2024年,5月C.GC区结合因子?GC区结合蛋白SP1是1.0x105的单体,能与DNA链上包括GGGCGG在内约20bp的序列特异结合。在SV40启动子区,从-70~-110的6个GC区全部与SP1结合,所以这个区域的DNA不会被降解。在胸腺嘧啶激酶启动子区,SP1既与上游的CTF(CAAT区结合蛋白)相互作用,又与下游的TFIID紧密相关。??GC区对SP1的结合是必需的,但该序列对于SP1亲和力却很不相同,证明GC区两翼序列同样在SP1的识别及结合过程中发挥作用。人们推测GC区、尤其是多次重复的GC区,与基因的永久型表达有关。第38页,共70页,星期六,2024年,5月d.八碱基对元件激
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