基于CFSE染色的猪淋巴细胞增殖试验方法的建立 .pdfVIP

赵和平等基于CFSE染色的猪淋巴细胞增殖试验方法的建立第2期159

免疫学技术与方法

基于CFSE染色的猪淋巴细胞增殖试验方法的建立

赵和平孙元袁远仇华吉

(中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室,哈尔滨150001)

中国图书分类号S852文献标识码A文章编号1000484X(2009)02015905

[摘要]目的:建立一种方便可靠的评价猪只细胞免疫水平的试验方法。方法:用终浓度分别为3、6、9和12g/ml的

刀豆素A(ConA)刺激经羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)染色的猪外周血单个核细胞(PBMC)3、5和7天,然后用荧光

标记的单克隆抗体对CD4+和CD8+细胞进行标记,最后利用流式细胞术分析。结果:不同浓度ConA刺激后,猪PBMC增殖能

++

力不同,ConA浓度为6g/ml时CD4和CD8细胞的细胞分裂指数最大,用MTT试验也获得相似结果。对PBMC刺激5天后

进行分析相对较好。结论:建立了一种基于活细胞染料CFSE染色的猪淋巴细胞增殖试验方法,该方法可以在单个细胞水平

上有效地分析刺激后CD4+和CD8+细胞亚群的增殖水平,进而评价细胞免疫水平。

[关键词]猪淋巴细胞;细胞免疫;CFSE染色;淋巴细胞增殖试验

AmethodfordetectingporcinelymphocyteproliferationbasedonCFSEstaining

ZHAOHePing,SUNYuan,YUANYuan,QIUHuaJi.DivisionofSwineInfectiousDiseases,HarbinVeterinaryResearch

Institute,TheChineseAcademyofAgriculturalSciences,Harbin150001,China

[Abstract]Objective:Todevelopamethodtoassessporcinecellmediatedimmunity(CMI).Methods:PBMCsfrompigswerestained

withintracellularfluorescentdye,CFSE,andstimulatedwithvariedamountsofConA(0,3,6,9,and12g/mL),andplatedin3replicatecul

turesfor3,5,or7days.ThenCD4+cellandCD8+cellswerelabeledwithfluorescentantibodies.Datawereacquiredusingflowcytometry

(FCM)andanalyzedusingCellQuestsoftware.Results:CelldivisionindicesofporcineCD4+andCD8+cellsweredifferentwhenporcine

PBMCswerestimulatedwithdifferentdosesofConA.TheresultsweresimilartothoseobtainedbyMTTmethod.Optimalresultswereobtained

whenporcinelymphocyteswerestimulatedfor5days.Conclusion:TheCFSEbasedmethoddevelopedinthisstudycanbeusedtoanalyzethe

proliferationofdifferentcellsubsetssimultaneonsly.

[Keywords]Porcinelymphocytes;Cellmediatedimmunity;CFSEstaining;Lymphocyteproliferation

目前对我国养猪业危害最大的主要是一些病毒TdR)法、MTT(四甲基偶氮唑盐)法等。这些检测方

性疾病,这些疫病