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兔病毒性出血症重组杆状病毒HP-VP60的构建及鉴定

龚文波;田丽梅;于作;古静;方鹏飞

【摘要】本研究利用Bac-to-Bac系统构建了表达兔出血症病毒LQ株VP60蛋白

的重组杆状病毒HP-VP60,并对其表达产物的血凝效价及免疫原性等进行鉴定,结

果显示该重组杆状病毒的表达产物具有良好的免疫原性,可用于制备RHDV亚单位

疫苗.

【期刊名称】《四川畜牧兽医》

【年(卷),期】2018(045)001

【总页数】3页(P21-23)

【关键词】兔出血症病毒;VP60基因;重组杆状病毒;免疫原性

【作者】龚文波;田丽梅;于作;古静;方鹏飞

【作者单位】华派生物工程集团有限公司,四川简阳641400;华派生物工程集团有

限公司,四川简阳641400;华派生物工程集团有限公司,四川简阳641400;华派生

物工程集团有限公司,四川简阳641400;华派生物工程集团有限公司,四川简阳

641400

【正文语种】中文

【中图分类】S858.292.65

兔出血症（RHD）俗称兔瘟，是一种急性、烈性、高度接触性传染病，以呼吸系

统出血和实质器官水肿、淤血及出血性变化为特征，可引起兔群大批发病和死亡

[1]。RHD病毒基因组中的主要结构蛋白VP60是病毒的免疫保护性抗原，在诱导

抗病毒感染的免疫反应中起重要作用[2]。本研究利用Bac-to-Bac系统构建了表达

RHDVLQ株VP60蛋白的重组杆状病毒HP-VP60，并对其表达产物的血凝效价

及免疫原性等进行鉴定，结果显示该重组杆状病毒的表达产物具有良好的免疫原性，

可用于制备RHDV亚单位疫苗。

1材料与方法

1.1质粒、菌种和细胞pT-VP60质粒（含有RHDVLQ株VP60基因）由华派生

物质检研发中心构建；pFastBacDual杆状病毒转移载体、DH10Bac感受态细胞

和Sf9细胞由华派生物质检研发中心保存。

1.2主要试剂DNA凝胶回收试剂盒、质粒提取试剂盒、醋酸纤维素膜（NC膜）

购自天根生化科技有限公司；ExTaqDNA聚合酶、DNAMarker、T4DNA连接

酶以及其他限制性内切酶均购自大连宝生物工程有限公司；DNA-RNA共提取试

剂盒和RHDV兔高免血清由华派生物质检研发中心自制；HRP标记的羊抗兔IgG

抗体、FITC标记的羊抗兔IgG抗体购自Sigma公司；转染试剂Lipofectamine

2000、胎牛血清购于ThermoFisher公司；SF-SFM培养基购自苏州市沃美生物

技术有限公司。

1.3引物的设计与合成本文引物序列见表1，由上海英潍捷基有限公司合成。

表1引物序列名称序列（5′-3′）酶切位点VP60F1

ggaattcATGGAGGGCAAAACCEcoRIVP60R1

cccaagcttTCAGACATAAGAAAAGCHindIIIVP60F2

ctagctagcATGGAGGGCAAAACCCGCACAGNheIVP60R2

cggggtaccTCAGACATAAGAAAAGCKpnIP10FGTGGGGTATCGACAGAGTGC

P10RGGAGTATACGGACCTTTAPH-ProforACCTATATCGGATCTCGCSV40-

PArevGAGGAATGTCTAGGAATTGC

1.4VP60基因的扩增与克隆分别用VP60F1/VP60R1引物和VP60F2/VP60R2

引物，以pT-VP60质粒为模板进行PCR反应，扩增出VP60/EH和VP60/KN基

因片段，然后克隆入pMD19-T载体上，经菌落PCR及相应酶切鉴定后，将阳性

质粒送上海英潍捷基有限公司测序，鉴定正确的质粒命名为pTVP60/EH和pT-

VP60/KN。

1.5重组杆