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大青叶化学成分及抗氧化活性研究

闫峻;顾娟;冯硕;姬瑞芳;全庆华;刘永刚

【摘要】采用高效液相色谱-大气压化学电离质谱法(HPLC-APCI/MS)和直接进样

的电喷雾串联质谱法(ESI-MS2)分析大青叶乙酸乙酯、正丁醇和95％乙醇提取物

的化学成分.采用KromasilC18分析柱(4.6mm×250mm×5μm),以0.15％乙酸/

水-甲醇为流动相进行线性梯度洗脱,流速0.8mL/min,柱温25℃;采用全波长扫描

紫外检测器,检测波长分别为254nm和265nm;采用大气压化学电离源和电喷雾

电离源,在正、负两种离子模式下进行检测.结果表明,在大青叶乙酸乙酯、正丁醇

和95％乙醇提取物中共鉴别出39种化合物,包括生物碱类、有机酸类、核苷嘌呤

类、氨基酸类、黄酮类、糖类、卟啉类以及含硫类成分化合物.采用铁离子还原能

力法(FRAP)对大青叶的抗氧化活性进行评价,并用自由基清除能力法验证FRAP法

的测试结果.抗氧化活性评价结果表明,大青叶抗氧化活性部位主要集中在极性较低

的化学组分中,吲哚类、奎唑酮类和有机酸类化合物是其主要有效成分.该方法快捷、

灵敏,适用于中药化学成分分析和抗氧化活性评价.

【期刊名称】《质谱学报》

【年(卷),期】2019(040)004

【总页数】10页(P381-390)

【关键词】大青叶;化学成分;高效液相色谱-大气压化学电离质谱法(HPLC-

APCI/MS);电喷雾串联质谱(ESI-MS2);抗氧化活性

【作者】闫峻;顾娟;冯硕;姬瑞芳;全庆华;刘永刚

【作者单位】核工业北京地质研究院,北京100029;中日友好医院,北京100029;核

工业北京地质研究院,北京100029;北京中医药大学,北京100029;北京中医药大学,

北京100029;北京中医药大学,北京100029

【正文语种】中文

【中图分类】O657.6

大青叶(IsatidisFolium)是十字花科植物菘蓝的干燥叶，为临床常用中药，用于治

疗温邪入营、高热神昏、发斑发疹、黄疸热痢、痄腮、喉痹、丹毒和痈肿等症状

[1]。大青叶的化学成分主要包括吲哚类、喹唑酮类、芥子苷类、有机酸类和氨基

酸类化合物等[2]，具有抗病原微生物、抗内毒素、抗炎、增强免疫、解热等药理

活性[3]，是应用广泛的中成药的原料药之一。

目前，对中药及天然产物化学成分的分析主要采用溶剂分配和柱色谱法将其分离为

单一化合物，然后用红外、紫外、核磁等化学方法对其结构进行鉴定，此方法费时，

且无法对微量和痕量组分进行分析[4]。随着色谱、质谱及其联用技术的发展，特

别是电喷雾电离(ESI)、大气压化学电离(APCI)等软电离质谱技术的发展，可同时

完成成分分离和结构鉴定，是目前研究中药及天然产物化学成分的有效方法[5]。

现代研究表明[5]，自由基会损伤机体，与许多疾病的发生发展有着密切联系。传

统的合成抗氧化剂虽然具有较强的抗氧化能力，但是长期服用会产生一定的毒性，

甚至会致畸和致癌[5]。大青叶具有一定的抗氧化活性，目前对大青叶的研究主要

集中在不饱和脂肪酸类和多糖类成分[6-7]，较少涉及抗氧化活性成分的研究。对

抗氧化活性组分进行筛选，继而确定其中抗氧化活性的有效成分，对大青叶的物质

基础研究具有重要意义。

本研究拟采用高效液相色谱-大气压化学电离质谱法(HPLC-APCI/MS)、高效液相

色谱-电喷雾电离质谱法(HPLC-ESI/MS)和电喷雾多级串联质谱法(ESI-MS2)分别

分析大青叶乙酸乙酯、正丁醇和95%乙醇提取物的化学成分，同时，采用铁离子

还原能力法(FRAP)对大青叶的抗氧化活性进行评价，并通过自由基清除法(DPPH)

验证FRAP法的评价结果，以期为大青叶药效物质基础研究、质量控制标准的制订

以及谱效关系的研究提供依据。

1实验部分

1.1主要仪器与装置

Waters2695高效液相色谱仪：美国Waters公司产品；FinniganLCQ离子阱质

谱仪：美国Finnigan公司产品；自动酶标仪：奥地利CliniBio公司产品。

1.2主要药材与试剂

大青叶药材：购于北京同仁堂长春药店，经长春中医药大学王淑敏教授鉴定为十字

花科植物菘蓝的干燥叶；靛蓝和靛玉红对照品：中国药品生物制品检定所产品；吲

哚-3-甲醛对照品：阿拉丁试剂(上海)有限公司产品；胞苷、腺嘌呤、尿苷、鸟苷、

腺苷、苯丙氨酸、脯氨酸、精氨酸和苹果酸对照品，以及1,