脂多糖诱导大鼠急性肺损伤时核因子-KB信号转导及盐酸氨溴索的作用.doc

脂多糖诱导大鼠急性肺损伤时核因子－ＫＢ信号转导及盐酸氨溴索的作用

目的探讨脂多糖(LPS)诱导的大鼠急性肺损伤(acutelunginjury，ALl)时核因子kB(NF-kB)的信号转导，以及盐酸氨溴索(AMB)对其的作用。方法雄性sD大鼠108只，实验分为两部分：第一部分选择其中90只，采用随机排列表法分为6组(n=15)：A组无菌生理盐水(Ns)0.5ml腹腔注射1h后，再腹腔注射Ns0.5ml；B组腹腔注射AMB10m／kg1h后腹腔注射NS0.5ml；c组腹腔注射Ns0.5ml1h后腹腔注射LPS5mg／kg；D、E、F组分别腹腔注射AMB5、10、20mg／kg后1h腹腔注射LPS5mg／kg。各组分别按1、2、4h再分为3个亚组，每组5只。采用酶联吸附免疫法(ELISA)测定肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子-a(TNF-a)、白介素-1β(IL-1β)和巨噬细胞炎性蛋白－2(MIP-2)水平，并测定BALF中乳酸脱氢酶(LDH)与总蛋白量的变化。采用蛋白印迹法(Westernblot)测定肺组织细胞胞核中NF-kBp65、胞浆中NF-kB抑制蛋白-α(IxBα)及c－Jun氨基末端激酶(JNK)的表达。第二部分选择18只大鼠按上述分组法随机分为6组(n=3)，A、B、c、D、E、F组，给药方法同第一部分，腹腔注射Ns(A组、B组)或腹腔注射LPS(c、D、E、F组)后4h观察大鼠肺组织病理形态学变化。结果第一部分：与A组比较，c、D、E、F组BALF中LDH、总蛋白量、TNF-α、IL-1β和MIP-2均明显升高(P＜0.05或P＜0.01)；与c组比较，E、F组上述指标均降低(p＜0.05或P＜0.01)。与A组比较，c、D、E、F组肺组织细胞中的NF-kBp65与JNK表达明显增多(P＜0.01)，而IKBα的表达量减少(P＜0.01)；与c组比较，E、F组NF-tcBI65与磷酸化JNK的表达减少(P＜0.05或P＜0.01)，而IxBα的表达量增多(P＜0.05)或P＜0.01)。第二部分：A、B组肺组织形态学正常，c组呈明显的肺损伤病理形态学改变，D组肺损伤程度与c组相似，E、F组肺损伤程度较c组减轻。结论AMB可以减轻LPS诱导大鼠ALl，其机制可能与抑制肺组织细胞NF-kBp65与JNK的活化，并促进IxBα的表达，以及下调TNF-a、IL1β和MIP-2的表达有关，且呈剂量依赖性。

标签：急性肺损伤；脂多糖；核因子-KB；c-Jun氨基末端激酶；盐酸氨溴索急性肺损伤(ALI)是一种常见的临床危重综合症，严重感染、创伤及休克等因素均可导致其发生。其临床表现主要为急性起病、严重的低氧血症，以及胸部x线示弥漫性渗出等，但其发病机制尚未完全阐明。研究表明炎症介质的大量产生和释放是导致ALI发生的重要机制。核因子-kB(NF-kB)作为一种转录因子，可诱导众多炎症介质基因的表达，而抑制NF-kB的激活可阻止炎症介质的产生。笔者研究了脂多糖(lipopolysaccaride，LPS)诱导的大鼠ALl时NF-kBp65亚基(NF-nBp65)、NF-xB抑制蛋白(IxBα)与e-Jun氨基末端激酶(JNK)的表达，炎症介质(TNF-a、IL-1、MIP-2)等的变化以及盐酸氨溴索(AMB)对其的作用。

1材料与方法

1.1实验动物与分组

108只清洁级雄性sD大鼠，体重196～273g，平均237g，12～14周龄(浙江医学科学院实验动物中心提供)。实验前禁食12h，不禁水。实验分为第一、第二部分。第一部分选择其中90只大鼠，采用随机排列表法分为6组(n=15)：A组无菌生理盐水(Ns)0.5ml腹腔注射1h后，再腹腔注射Ns0.5ml；B组腹腔注射AMB10mg／kg后1h腹腔注射NSO.5ml；C组腹腔注射Ns0.5ml1h后腹腔注射LPS5mg／kg；D、E、F组分别腹腔注射AMB5、10、20mg／kg1h后腹腔注射LPS5mg／kg。各组分别按1、2、4h再分为3个亚组，每组5只。第二部分选择其中18只大鼠随机分为6组(n=3)，A、B、c、D、E、F组，给药方法同上，但不作肺泡灌洗，作病理形态学观察。

1.2动物模型

动物以硫喷妥钠30mg／kg腹腔注射麻醉。(1)腹腔注射Ns(A、B组)或腹腔注射LPS(c、D、E、F组)后1、2、4h大鼠腹腔注射加倍剂量的硫喷妥钠处死。行气管切开术，插入自制14G血管留置导管，深度约1cm，缝线结扎固定以防BALF溢出。经导管缓慢注入无菌冰Ns8m1，并回抽，反复5次后将动物置于头低足高位，回收BALF，回收率均70％。BALF在4℃时以2000r／min离心10min，取上