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化妆品皮肤致敏检测方法整理

化妆品引起的皮肤过敏可分为诱导接触、诱导阶段和激发接触三个阶段,诱

导接触是由于机体接触过敏原而诱导出致敏状态,此时皮肤产生较轻的反应或

无明显反应,经过一段时间(几周,甚至几年)的诱导期,如果机体再次接触过

敏原,就会引起迟发性超敏感反应,且在最初染毒部位以外的皮肤均可发生。

皮肤致敏可解分为5个方面:①化学物穿透进入皮肤;②与内源性蛋白反应;

③皮肤代谢,有的化学物,称为前半抗原,需要通过皮肤代谢进行活化成为半抗

原之后才具备结合皮肤蛋白的能力。④树突细胞(DC)激活:半抗原化的蛋白被

未成熟的DC细胞识别,导致DC活化,然后启动一系列的反应。激活后的DC

具有一些特性,如上调细胞表面标志物(CD83或cD86),分泌多种细胞因子(IL

一1β),下调参与抗原摄取的蛋白(如水通道蛋白)。⑤抗原特异性免疫反应。

传统人体实验

单次斑贴试验:受试者接受单次斑贴,分别持续24、72或96h,在诱发期

间和去除斑贴后的10一14d,用激发斑贴作用48h后,对皮肤反应进行评分。

通常在激发斑贴后,需继续试用产品4w,该试验仅能检测潜在的有效致敏剂,敏

感性不足。

人体重复斑贴试验:重复斑贴基本上与上述方法相同,不同的是在10一

14d的致敏诱导期间,每隔2d在同一部位连续给予受试物数次;2周后,必须

在另一位置的皮肤上再做一次斑贴测试。

人体最大化试验:包括同一皮肤位置的5次重复的4h8封闭式斑贴,在去

除和再施加斑贴之间有24h的休止期。刺激性物质的浓度是引起中等程度红斑

的浓度,对非刺激物质,试验部位诱发前预先经5%的SLS斑贴2h4处理。最

后一次诱发斑贴后,休止2周。在发生轻微刺激反应的皮肤部位经4h8封闭斑

贴后进行评分,记录致敏指数。人体最大化试验可能对皮肤造成严重的后果,操作

起来有一定的风险。

通常认为,已通过动物实验或其它有效的方法证实为致敏原的化妆品原料,

不应当再用志愿者进行测试。由于每次测试通常需要150一200名志愿者参与,

不仅耗时,且非常昂贵,尽管考虑使用人体最大化试验可能会减少志愿者数量,

但这种测试会增加某一反应的严重程度。而且人体志愿者个体反应差异较大,

为了获得95%置信区间,仍然需要大量志愿者参与才能获得可靠结果。但基于

伦理的考虑,人体试验总是难以实现预期的效果。

体外代替方法动物实验

豚鼠最大值试验(Guinea,GPMT)使用福氏完全佐剂作为免疫增强剂,试验

包括皮内注射、局部接触诱导和激发封闭斑贴三个过程。试验组至少10只豚鼠,

对照组5只,诱导受试物浓度为能引起皮肤轻度刺激反应的最高浓度,激发接

触受试物浓度为不能引起皮肤刺激反应的最高浓度。第0天(诱导接触),将受

试物皮内注射人豚鼠颈背部皮下,第7d(诱导接触)将涂有受试物的封闭斑贴贴

敷在同一注射部位去毛区固定48h。2周后第21d(激发接触),再将涂有受试物

的斑贴贴敷在同一注射部位去毛区固定2h4。激发接触后,除去受试物斑贴后

24h、48h和72h观察和比较实验组与对照动物的皮肤反应强度。

Buehler封闭斑贴试验(BuehlerTest,BT)不使用佐剂,只在诱导期和激

发期局部皮肤上涂抹受试物。试验选用至少20只豚鼠,对照组至少10只。受

试物诱导浓度和激发浓度与GPMT相同,试验时直接将受试物斑贴涂在去毛皮

肤上,封闭贴敷6h。第7天和16天以同样方法重复一次。第28天在豚鼠背部

另一侧皮肤上涂抹受试物斑贴固定6h,进行激发接触。激发接触后24h和48h观

察皮肤红斑和水肿形成。由于没有使用FCA免疫增强剂来刺激免疫系统,BT的

灵敏度比GPMT低。

LLNA，(小鼠局部淋巴结实验):是鉴别皮肤变态反应的替代方法之一,2002年

被OECD正式采用为试验指南(TG429),同时也是被欧盟675/48/EEc认可

的方法(B42)的方法。其原理是皮肤变态反应在诱导阶段即可引起接触部位局部

淋巴结T