香蕉枯萎病菌4号小种的快速检测方法 .pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利说明书

(10)申请公布号CN101178379A

(43)申请公布日2008.05.14

(21)申请号CN200710032118.2

(22)申请日2007.12.05

(71)申请人华南农业大学

地址510642广东省广州市天河区五山

(72)发明人王振中廖林凤纪春艳董章勇

(74)专利代理机构广州粤高专利代理有限公司

代理人林丽明

(51)Int.CI

权利要求说明书说明书幅图

(54)发明名称

香蕉枯萎病菌4号小种的快速检测

方法

(57)摘要

本发明公开了一种香蕉枯萎病菌4

号小种的快速检测方法，包括抽提香蕉植

株的DNA、电泳检测模板DNA、PCR扩

增DNA扩增、PCR循环和电泳检测步

骤，利用香蕉枯萎病菌4号小种的引物进

行香蕉植株的DNA进行PCR扩增和循环

以后进行电泳检测，整个检测过程耗时6

小时之内，大大提高了检测效率，无需对

样品中的病原菌进行分离和纯化，步骤简

单，容易操作，无需复杂、精密仪器，更

加准确灵敏，有利于快速、便捷开展植物

检疫工作。

法律状态

法律状态公告日法律状态信息法律状态

权利要求说明书

1.一种香蕉枯萎病菌4号小种的快速检测方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)抽提香蕉植株的DNA；

(2)电泳检测(1)的模板DNA；

(3)PCR扩增DNA扩增；

(4)PCR循环；

(5)电泳检测。

2.根据权利要求1所述香蕉枯萎病菌4号小种的快速检测方法，其特征在于步骤(3)

所述PCR扩增DNA的扩增反应体系如下：

模板DNA1μL；

10×PCRBuffer2.5μL；

Mgsup2+/sup，2.5μL25mmoL/L；

dNTPs，2μL25mmoL/L；

引物RF4-110μmoL/L，1μL；

引物RF4-210μmoL/L，1μL；

Taq酶5U/μL，0.2μL；

灭菌ddHsub2/subO适量加入至反应体系总体积25μL。

3.根据权利要求2所述香蕉枯萎病菌4号小种的快速检测方法，其特征在于所述引

物分别为：

引物RF4-1：5’-TGCGGGTCCTATTAGTAC-3’；

引物RF4-2：5’-GGTCCTCACACTCCAATC-3’。

4.根据权利要求1所述香蕉枯萎病菌4号小种的快速检测方法，其特征在于步骤(4)

所述PCR循环为94℃预变性5min；94℃变性30s，52℃退火30s，72℃延伸45s，

35个循环；72℃延伸10min。

5.根据权利要求1所述香蕉枯萎病菌4号小种的快速检测方法，其特征在于步骤(5)

所述电泳检测是取出步骤(4)反应混合液5μL与载样缓冲液混合，1％琼脂糖凝胶电

泳检测扩增产物903bp特异条带。

说明书

技术领域

本发明涉及植物保护和生物技术领域，尤其涉及香蕉枯萎病菌4号小种的快速检测

方法。

背景技术

香蕉镰刀菌枯萎病又称香蕉巴拿马病、黄叶病，是由镰刀菌侵染引起维管束坏死的

土传性病害，病原菌为尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusariumoxysporumf.sp.cubense)。

病原菌从受伤的根茎侵入，通过寄主维管束向茎上发展，并进一步向叶部蔓延。当

植株枯死后，病原菌随残体遗留在土壤中，随着水流或带菌的农具在蕉园内再进行

自然传播，其厚垣孢