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高脂饲料诱导幼鼠非酒精性脂肪肝模型的建立

林敏华;邓桂清;欧宇轩;陈芷琳;黄佳栓;康美霞;李锦新

【期刊名称】《《医学理论与实践》》

【年(卷),期】2019(032)015

【总页数】4页(P2321-2323,2326)

【关键词】高脂饮食;儿童非酒精性脂肪肝病;动物模型

【作者】林敏华;邓桂清;欧宇轩;陈芷琳;黄佳栓;康美霞;李锦新

【作者单位】广州医科大学儿科学院广东省广州市511436;广州医科大学第三临

床学院;广州医科大学市一临床学院;广州医科大学第一临床学院;广州医科大学基

础医学院

【正文语种】中文

【中图分类】R-33

儿童型非酒精性脂肪肝病(Non-alcoholicfattyliverdisease，NAFLD)是一种除

外酒精及其他明确肝损害因素，以肝细胞弥漫性脂肪变为主要特征的临床病理综合

征[1]。我国儿童型NAFLD发病率为3.4%，随着儿童超重、肥胖发生率增加，

NAFLD已成为我国儿童最常见的慢性肝病之一[2]，若NAFLD长期迁延不愈，可

导致患儿在成年时罹患心脑血管病、糖尿病等疾病的风险增高。目前尚未证实何种

药物治疗儿童型NAFLD有效，有关发病机制、药物治疗研究甚少。基础研究方面，

儿童型NAFLD造模文献也较少。因此本实验通过高脂饮食诱导建立幼鼠NAFLD

模型，为基础研究提供可靠且病变符合儿童型NAFLD的动物模型。

1材料和方法

1.1实验动物3周龄雄性SD幼鼠SPF级，体质量50～80g，由广东省实验动物

中心提供。

1.2主要试剂与仪器丙氨酸氨基转移酶试剂盒，天门冬氨酸氨基转移酶试剂盒，

葡萄糖试剂盒，甘油三酯试剂盒，总胆固醇试剂盒，高密度脂蛋白试剂盒，低密度

脂蛋白试剂盒,上海科华生物工程股份有限公司；大鼠胰岛素(INS)ELISAKit，武

汉基因美生物科技有限公司；7020型全自动生化分析仪，日本日立公司；ST-360

型酶标分析仪，上海科华实验系统有限公司。

1.3方法

1.3.1饲料的制备：委托广东省实验动物中心制备高脂饲料，能量为5.24kcal/g，

具体配比为：酪蛋白≥88%为200g/kg，L-胱氨酸为3g/kg，麦芽糖糊精为

125g/kg，蔗糖为68.8g/kg，纤维素为50g/kg，豆油为25g/kg，猪油为

245g/kg，矿物质AIN-93为35g/kg，维生素AIN-93为10g/kg，氯化胆碱为

2.5g/kg；普通饲料能量3.4kcal/g，购自广东省实验动物中心。

1.3.2动物模型的制备：3周龄雄性SD幼鼠16只，随机分为对照组和造模组，每

组8只。适应性饲养3d后，对照组每天喂养普通饲料，造模组每天喂养高脂饲料，

每组予自由饮水和自由进食，连续饲养6周。广州医科大学实验动物中心提供清

洁无尘、适宜温湿度、良好采光的饲养环境。

1.4观察指标

1.4.1一般情况：实验期间，观察大鼠生活习性、毛发颜色、行为习惯等特点，每

周记录幼鼠体重及进食量。

1.4.2肝脏质量与肝指数：6周后，大鼠禁食24h，腹腔注射1%戊巴比妥

4mg/kg麻醉，心脏采血5ml，取肝称重。肝指数=(肝脏质量/体质量)×100%。

1.4.3血清生化指标检查：检测血清中门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转

移酶(ALT)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、血糖

(GLU)、胆固醇(CHO)、胰岛素(INS)含量，计算胰岛素抵抗(HOMA-IR，HOMA-

IR=GLU×INS/22.5)。

1.4.4肝组织病理学检查：(1)石蜡切片与HE染色：新鲜肝脏用bouin液固定

24h，经梯度酒精脱水，TO透明剂透明，石蜡包埋，切片后，行HE染色。镜下

观察脂肪变情况并进行NAFLD活动度评分(NAFLDactivityscore，NAS)，评分

标准参照美国国立卫生研究院NASH临床研究网病理工作组指南。(2)冰冻切片与

油红染色：新鲜组织用4%多聚甲醛固定，经梯度蔗糖溶液脱水，OCT包埋，冰

冻切片后，行油红染色。观察肝组织脂质沉积情况。

1.5统计学方法使用SPSS