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⽪肤致敏试验简介

试验原理

具有致敏作⽤的化学物经⼀定途径进⼊机体，与组织蛋⽩结果形成完全抗原，刺激免疫活性细

胞产⽣致敏淋巴细胞或体液抗体；经1~2周致敏期，使体内免疫反应得到充分发展，形成⼀定数

量的致敏淋巴细胞或特异抗体。当再次接触（激发）时使机体对该化学物产⽣感受性增⾼的状

态，以⼀定的异常形式表现出来。

试验⽅法

⽬前⽪肤致敏性的检验⽅法有：豚⿏最⼤剂量法（GPMT）、封闭式贴敷法（Buehler试验）、

局部淋巴结试验法（LLNA），其中豚⿏最⼤剂量法（GPMT）和封闭式贴敷法（Buehler试

验）是最常⽤的、⽣物安全性评价中使⽤率最⾼的两种⽅法。豚⿏最⼤剂量试验是最敏感的⽅

法，欧洲国家使⽤此⽅法较⼴泛；封闭式贴敷试验适⽤于局部产品，美国常⽤此⽅法。局部淋

巴结试验（LLNA）被经济与合作发展组织接受作为当前豚⿏试验的唯⼀替代⽅法，该法对动物

保护⽅⾯也有所改善，也被认可⽤于化学物致敏活性的检测。

⼩⿏局部淋巴结试验（LLNA）

原理：过敏剂可诱导引起作⽤位点的引流淋巴结内淋巴细胞增殖，其增殖程度与过敏剂的剂量

和致敏效⼒成正⽐。从⽽提供了⼀种简单的获取定量测量致敏性的⽅法。BrdU是胸腺嘧啶核苷

的类似物并可掺⼊增殖细胞的DNA中。通过酶联免疫吸附试验⽅法测量试验动物⽿部引流淋巴

结内掺⼊BrdU的量来指⽰增殖细胞的数量增加，并⽤试验组与对照组的平均增殖量之⽐（SI）

来评价增殖情况，确定待测物质的致敏潜能。

动物管理：成年未⽣育过且未受孕的雌性⼩⿏，8周龄~12周龄，动物体重不超过平均体重的

±20%。

试验样品：应为液体、悬浮液、凝胶或膏状物，此类样品可应⽤⼩⿏的⽿部。

试验设置：设置⼀个或多个对照组、⼀个阴性对照组和⼀个阳性对照组；每组⾄少使⽤4只动

物。经常进⾏LLNA时不必每次试验都包括阳性对照，但⾄少每6个⽉应采⽤⼀次阳性对照。

试验步骤：LLNA检验化学物⼀般采⽤剂量反应⽅式，医疗器械供试样品可能为浸提液，此时仅

有单剂量⽤于试验，⼀般可检验未稀释的浸提液。当浸提液含有⾼毒性成分时，毒性在LLNA中

可导致阴性反应。因此在LLNA中检验⾼毒性浸提液时，推荐采⽤剂量反应⽅式和稀释浸提液。

在试验开始和结束时应记录每只动物体重，将适宜的样品应⽤于指定⼩⿏双⽿的背侧，剂量为

25µL/d，连续3天。为了检验试验样品的潜在毒性，试验中应每天观察双⽿可能会⼲扰结果解释

的刺激迹象并记录观察结果，通过测定每只动物或汇集的淋巴结样品来确定淋巴结反应。

结果与评价：测定每只⼩⿏每分钟淋巴结细胞计数（cpm）的放射活性⽔平。试验cpm除以空⽩

cpm得出刺激指数（SI），试验样品SI≥3.0，考虑阳性，为致敏物。阳性对照样品SI应≥3.0。

豚⿏最⼤剂量法（GPMT）

原理：单⼀化学物采⽤豚⿏最⼤剂量试验，对材料在试验条件下使豚⿏产⽣⽪肤致敏反应的潜

能做出评定。

动物与管理：使⽤健康、初成年的豚⿏，试验开始时体重应为300g~500g，雌雄不限，雌⿏应

未产并⽆孕。

试验材料若为粉末或液体，⾄少使⽤10只动物接触试验样品，⾄少使⽤5只动物作为对照组。

对于浸提液试验，⾄少使⽤10只动物接触试验样品，⾄少使⽤5只动物作为溶剂对照组。

试验步骤：

⽪内诱导阶段

说明：

1——头端；

2——0.1mL⽪内注射点；

3——去⽑的肩胛⾻内侧部位；

4——尾端。

按上图在每只动物去⽑的肩胛⾻内侧部位成对⽪内注射0.1mL。

A部位：注射FCA与选定的溶剂以50：50体积⽐混合的稳定性乳化剂，对于⽔溶性材料，溶剂

选⽤⽣理盐⽔。

B部位：注射试验样品即未经稀释的浸提液；对照组动物仅注射相应溶剂。

C部位：试验样品以50：50的体积⽐例与弗⽒完全佐剂和溶剂（50%）配置成的乳化剂混合后

进⾏⽪内注射；对照组注射空⽩液与佐剂配成的乳化剂。

局部诱导阶段：⽪内诱导阶段后6~8天，按部位B中选定的浓度，采⽤⾯积约8cm2的滤纸或吸

⽔性纱布块局部贴敷于每只动物的肩胛⾻内侧部位，覆盖诱导注射点。如按⽪内诱导阶段的最

⼤浓度未产⽣刺激反应，应在局部敷贴应⽤前22~26h，试验区⽤10%⼗⼆烷基硫酸钠进⾏预处

理，按摩导⼊⽪肤。⽤封闭式包扎带固定敷贴⽚，并于46~58h后除去包扎带和敷贴⽚。对照组

动物使⽤空⽩液同法操作。

激发阶段：局部诱导阶段后13~15d后，⽤试验样品激