DB35T 2034-2021 鸭瘟强弱毒核酸鉴别诊断技术.docxVIP

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福建省地方标准DB35/T2034—2021

鸭瘟强弱毒核酸鉴别诊断技术

Quarantineprotocolforvirulentandattenuatedstrainsofduckplaguevirusinfection

2021-12-29发布2022-03-29实施

福建省市场监督管理局发布

I

DB35/T2034—2021

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4缩略语 1

5疫病概述 1

6聚合酶链反应 2

7结果判定 3

附录A（规范性）试剂的配制 4

附录B（资料性）电泳图 6

附录C（资料性）参考序列 7

II

DB35/T2034—2021

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由福建省农业科学院提出。

本文件由福建省农业农村厅归口。

本文件起草单位：福建省农业科学院畜牧兽医研究所、福建省动物疫病预防控制中心、龙岩市动物疫病预防控制中心、福州市动物疫病预防控制中心、三明市动物疫病预防控制中心。

本文件主要起草人：万春和、黄瑜、傅光华、陈长福、刘道泉、陈小丽、程龙飞、刘荣昌、施少华、陈红梅、傅秋玲、江南松、李中华。

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DB35/T2034—2021

鸭瘟强弱毒核酸鉴别诊断技术

1范围

本文件规定了鸭瘟强弱毒核酸鉴别诊断的聚合酶链反应（PCR）的操作技术。本文件适用于鸭瘟强弱毒核酸实验室鉴别诊断和流行病学调查。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

DNA：脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleicacid）

dNTP：三磷酸脱氧核苷酸（Deoxynucleosidetriphosphate）PCR：聚合酶链式反应（Polymerasechainreaction）

TAE：三羟甲基氨基甲烷-硼酸-乙二胺四乙酸（Trihydroxymethylaminomethane-boricacid-ethylenediaminetetraaceticacid）

5疫病概述

5.1鸭瘟

鸭瘟，又称为鸭病毒性肠炎，最早于1923年在荷兰发生和流行，随后在世界多国均有报道，几乎所有的雁形目禽类（如多品种鸭、鹅和天鹅）均可发生鸭瘟。黄引贤等于1957年在广州发现鸭瘟后，在我国南方主要养鸭区广泛流行，给养鸭业曾造成巨大的直接经济损失。

5.2UL2基因特点

鸭瘟病毒，又称为鸭肠炎病毒或鸭疱疹病毒1型，是引起雁形目禽类发生鸭瘟的病原。鸭瘟弱毒，

即鸭瘟活疫苗毒，自1960年以来一直用于防控鸭瘟。鸭瘟病毒UL2基因编码尿嘧啶DNA糖基化酶，是一个非必需基因，在DNA复制过程中可将脱氧尿嘧啶核苷三磷酸错误插入或是胞嘧啶的脱氨基造成的尿嘧啶残基切除，保证DNA复制的正确性和顺利进行。对GenBank中登录的鸭瘟病毒（强毒株和弱毒株）的UL2

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DB35/T2034—2021

基因进行分析比较发现，强毒株UL2基因长度为1002bp，而弱毒株UL2基因长度为474bp，且与强毒株UL2基因相比具有528bp核苷酸序列缺失。

6聚合酶链反应

6.1主要仪器设备

6.1.1PCR仪。

6.1.2高速台式冷冻离心机。

6.1.3微量移液器。

6.1.4组织匀浆器。

6.1.5电泳仪。

6.1.6电泳槽。

6.1.7紫外凝胶成像系统。6.2试剂

6.2.1水，应符合GB/T6682所规定一级水的要求。

6.2.2磷酸盐缓冲液，配置方法应符合附录A中A.1的规定。

6.2.310%十二烷基磺酸钠溶液，配置方法应符合附录A中A.2的规定。

6.2.4蛋白酶K溶液，配置方法应符合附录A中A.3的规定。

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