HPLC实验报告_原创文档.pdf

水体中雌激素的高效液相色谱法分析

李甜甜指导老师：凌婉婷

1前言

目前,环境内分泌干扰物(endocrinedisruptingchemicals,edcs)被列为继臭氧层

空洞和地球变暖之后的又一新的环境污染问题,成为当前国际上研究的热点。至今所报道的

各种内分泌干扰物中,雌性天然激素及其合成激素被认为是最重要的干扰物之一。这些外源

性化学物进入体内后通过和内源性雌激素相同的作用机制(主要是核受体蛋白介导作用)干

扰内分泌系统而产生一系列的不良作用,包括致癌、损伤生殖功能导致神经系统和免疫系统

异常等。

环境中的雌激素主要是由人类和动物的新陈代谢而产生的，随着尿和粪便等排泄物而进

入废水中，经过污水处理厂处理后进入到自然水体中，并在城市水系统中的固液相之间进行

迁移和转化。再者，由于激素类药物在人类日常生活和养殖业中被大量使用，不同种类的雌

激素因此会进入城市污水管网，经污水处理厂处理后，排放进入环境。edcs是城市水循环过

程中长期存在的一类典型污染物，虽然其含量较低，但是在极低的浓度(ng·l-1)水平下就

能造成动物内分泌紊乱、雌性化、发育不良以及畸形化等不良影响，而且有可能和水体中残

留的其他雌激素类物质发生协同作用,因此这类物质对生态环境潜在的危害性是不可忽视的。

同时由于edcs的亲脂和难降解特性，在城市水循环的过程中会逐渐积累，威胁到城市居民

的身体健康，对生态环境存在潜在的危害性，已经成为城市环境保护的核心问题，急需针对

城市水体中的edcs开展基础研究工作。因此在环境中建立一套科学、完善、高效的雌激素

类物质检测方法是十分必要的。

近年来，随着色谱、质谱及色谱-质谱联用技术等的快速发展，微量雌激素类污染物的检

测技术也随之有较快的发展。目前测定edcs的方法有gc-ms法、hplc法,荧光光度法,

酶联免疫分析法(elisa),极谱法等。其中gc-ms和hplc是比较常用的方法。gc-ms法

需对样品进行酯化处理,操作繁琐,重复性差。本文采用固相萃取(spe)浓缩净化技术,通

过高效液相色谱(hplc)分离,荧光检测器进行定性定量分析,建立了快捷、便利、有效的对

水中内分泌干扰物ee2的测定方法,并可在污水监测中得到应用。

2实验材料

2.1仪器与试剂

lc-20a高效液相色谱仪，rf-10axl荧光检测器。色谱柱：inertsilods-sp-c18（150mm

×4.6mm,5μm）。固相萃取仪（hp-6019-12spe），圆周形氮气吹干仪，固相萃取柱（6ml）。

炔雌醇（2μg/ml,ee2），实验用水（超纯水），甲醇、乙腈均为hplc级试剂。c18，玻璃

棉。

2.2标准溶液及模拟水样的配制

分别取2μg/mlee20.25ml，0.5ml，1ml，2ml，5ml，7.5ml于棕色容量瓶中，并用甲

醇稀释定容至10ml，摇匀，配制成不同浓度的标准溶液，保存待用。

取2μg/mlee20.5ml于容量瓶中，用超纯水定容至100ml，摇匀，配制模拟水样，保

存待用。

2.3c18spe柱的制作

订制6ml固相萃取玻璃柱管，在柱管底部填入一定量的玻璃棉，称取0.2gc18填料加入

柱管中，轻轻敲打柱身使其均匀，将填料填平、压实，上层再覆盖一层玻璃棉，再以清洁的

玻璃棒按压使其装填紧密，保存待用。

2.4色谱条件

色谱柱：inertsilods-sp-c18（150mm×4.6mm,5μm）；流动相为甲醇/乙腈/水（体积比

为25:30:45）；流速：1.0ml/min；柱温：40℃；进样量：20μl；荧光检测器波长：激发波

长为280nm，发射波长为310nm。

2.5样品的前处理

将配制好的100ml模拟水样以约为5~8ml/min的流速通过已分别用5.00ml甲醇和5.00ml