紫外可见分光光度法 (4).ppt

2．单色器：分离单色光包括狭缝、准直镜、色散元件（1）色散元件：将复合光散射成一系列的单色光。棱镜：对不同波长的光折射率不同分出光波长不等距光栅：衍射和干涉分出光波长等距第31页,共62页，5月，星期六，2024年，5月3．吸收池：盛放样品溶液的器皿玻璃：能吸收UV光，仅适用于可见光区石英：不能吸收紫外光，适用于紫外和可见光区（3）狭缝：光的进出口。进光狭缝出光狭缝（2）准直镜：聚光镜发散光平行光聚焦出狭缝第32页,共62页，5月，星期六，2024年，5月第33页,共62页，5月，星期六，2024年，5月4．检测器：将光信号转变为电信号的装置。包括：光电池、光电管、光电倍增管、二极管阵列检测器5．记录装置：讯号处理和显示系统显示方式：T、A、C、ε第34页,共62页，5月，星期六，2024年，5月二、分光光度计的类型：1、单波长单光束分光光度计：特点：（1）结构简单，价格较便宜。（2）使用时来回拉动吸收池，存在移动误差。（3）对光源的稳定性要求高。（4）比色池要配对。第35页,共62页，5月，星期六，2024年，5月2、单波长双光束分光光度计：特点：（1）不用拉动吸收池，可以减小移动误差（2）对光源稳定性要求不高。（3）可以自动扫描吸收光谱。3、双波长双光束分光光度计：特点：（1）利用吸光度差值定量，不需要参比溶液（2）消除干扰和吸收池不匹配引起的误差。（3）价格昂贵，体积较大。第36页,共62页，5月，星期六，2024年，5月三、测量条件的选择（一）仪器测量条件的选择：1、吸光度范围的选择：A=0.2~0.8方法：（1）浓度高：少取样或稀释（2）浓度低：多取样或富集（3）改变吸收池的厚度。2、入射光波长的选择：最强吸收带的λmax方法：绘制吸收光谱第37页,共62页，5月，星期六，2024年，5月（二）参比溶液的选择：原则：扣除非待测组分的吸收。溶剂参比：仅有待测物质与显色剂的反应产物有吸收时。消除溶剂、吸收池等因素的影响。试剂参比：显色剂或其他试剂在测定波长处有吸收时。消除试剂中的组分的影响。第38页,共62页，5月，星期六，2024年，5月试液参比：试样中其他试剂在测定波长处有吸收，显色剂在测定波长处无吸收时。用不加显色剂的“试液空白”作参比，消除有色离子的影响。第39页,共62页，5月，星期六，2024年，5月第五节定性与定量分析一、定性分析：定性鉴别的依据→吸收光谱的特征：（1）吸收光谱的形状（2）吸收峰的数目（3）吸收峰的位置（波长）（4）吸收峰的强度（5）相应的吸光系数第40页,共62页，5月，星期六，2024年，5月1．对比吸收光谱的一致性同一测定条件下，与标准对照物谱图或标准谱图进行对照比较第41页,共62页，5月，星期六，2024年，5月2．对比吸收光谱的特征值第42页,共62页，5月，星期六，2024年，5月3、比较吸光度或吸光系数比值的一致性：例：第43页,共62页，5月，星期六，2024年，5月二、纯度检查：1）峰位不重叠：找λ→使主成分无吸收，杂质有吸收→直接考察杂质含量。2）峰位重叠：主成分强吸收，杂质无吸收/弱吸收→与纯品比较，若E↓，则含有杂质。杂质强吸收主成分吸收→与纯品比较，E↑，光谱变形则含有杂质。1、纯度检查（杂质检查）第44页,共62页，5月，星期六，2024年，5月2、杂质限量检查：例：肾上腺素中微量杂质——肾上腺酮含量计算：2mg/mL-0.05mol/L的HCl溶液，λ310nm下测定规定A310≤0.05即符合要求的杂质限量≤0.06%第45页,共62页，5月，星期六，2024年，5月三、定量分析：（一）微量单组分的定量方法：1、标准曲线法—最经典的方法配制一系列浓度不同的标准溶液，在相同的条件下分别测定吸光度A，绘制A—C曲线（工作曲线）。根据样品的A从工作曲线中找出对应的C值。第46页