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[高考揭秘]
从3年高考试题来看，高考命题思路常以某一生产生活或医学治疗为背景，内容考察内容几乎都与基因工程相关，也就是是说，即便主体是考察微生物培养，它仍然能够涉及微生物的转基因，所以我们这一块的复习一定要紧紧围绕基因工程，在复习中从以下几方面内容发力，还需多做新情景，将会收到良好的效果。
①PCR为目的基因提供酶切位点等内容相对困难，需要做全方位梳理
②基因工程难度大，需要多练限制酶选择，正反接检测和基因编辑等情景
③微生物的选择和鉴别是核心考点，结合基因工程改造近几年命题趋势
④细胞工程和胚胎工程：常以中国必威体育精装版的技术为背景考察。
⑤热点考察：新冠检测相关技术，酵母双杂等复杂情景
(题目主要来源：2019-2022年山东、湖南、湖北、河北、北京、广东卷)
;;PCR由穆里斯等人于1985年发明，为此穆里斯于1993年获得诺贝尔化学奖。;启示：寻找目的菌种时要?
根据微生物对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。;1.PCR的原理;条件;条件;3.引物;③延伸时需要加入两种引物，原因是
_____________________________________________________________________________
。
;4.PCR反应的基本步骤;4.PCR反应的基本步骤——（视频）;;[2019年新课标I卷]基因工程中可以通过PCR技术扩增目的基因。回答下列问题。
1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括____________________和______________________。
;[2019年新课标I卷]基因工程中可以通过PCR技术扩增目的基因。回答下列问题。
2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是______________。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是_____________________。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的_____________。
3）目前在PCR反应中使用Taq酶而不使用大肠杆菌DNA聚合酶的原因是
____________________________________________________________________。;6.旁栏思考题：用PCR可以扩增mRNA吗？
mRNA不可以直接扩增，到目前为止耐高温RNA聚合酶还没有发现;1.引物的基本要求：
?引???自身不能环化
?两种引物之间不能互补配对
?引物长度不宜过短，防止引物随机结合
2.③两种引物与模板链如何配对？
引物的5′端与模板链3′端互补配对;[典例]设计引物是PCR技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物(只标注了部分碱基序列)都不合理(如下图)，请分别说明理由。;[典例]如图中箭头表示一条引物结合模板的位置及扩增方向，请用箭头在方框内标出另一条引物的位置及扩增方向．;[2022烟台统考二模]三氯生是一种抑菌物质，具有优异的贮存稳定性，可以替代抗生素用于基因工程中筛选含目的基因的受体细胞。已知fabV（从霍乱弧菌中发现的烯脂酰ACP还原酶）基因可以使大肠杆菌抵抗三氯生。;2)在④步骤中，科研者需将大肠杆菌菌液利用稀释涂布平板法接种到加有三氯生的细菌培养基上，待菌落长成后，直接挑取菌落加入到PCR反应系统中进行基因鉴定。PCR过程中不需要先提取细菌DNA的原因是________________________________________________________________________________________。
3)某科研团队将可以受温度调控的基因插入上述选出的重组质粒中，构建了温度调控表达质粒（如图2）。其中C基因在低温下会抑制P1，R基因在高温下会抑制P2。如果将lacZ基因和GFP基因插入图2质粒中，使得最后表???为低温下只表达GFP蛋白，而高温下只表达lacZ蛋白。则lacZ基因插在_____________之间，GFP基因插在______________________之间。;结论：
①n次复制后含有引物A的_______个。
含有引物B的_______个。含有引物A和B的_______个。
②从第____次扩增开始能够获得单纯的目的基因。
;[2023咸阳模拟节选]大丽轮枝菌是引起棉花黄萎病的主要病原菌。为观察大丽轮枝菌对棉花根的侵染路径，研究人员利用绿色荧光蛋白基因（sGFP）转染大丽轮枝菌，培育出表达绿色
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