6种酶的测定--关松荫.pdf

cellulase纤维素酶

sucroseinvertase蔗糖转化酶

滴定法

1试剂配制

（1）20%蔗糖

（2）甲苯

（3）PH5.5醋酸盐-磷酸盐缓冲液

（4）33%KI液

（5）HSO（1：3）

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（6）淀粉指示剂：取0.5g淀粉溶于少许水中，加10ml煮沸的

25%NaCl液，煮沸1min

（7）0.1NNaSO滴定液：配制方法与标定方法见多酚氧化酶测定

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（8）菲林溶液：取34.64gCuSO.5HO溶于蒸馏水，并稀释至500ml

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（a）取173g酒石酸钾钠和50gNaOH溶于蒸馏水，并稀释至500ml

（b），使用前将（a）（b）按1：1混合

2操作步骤

取10g土壤置于100ml三角瓶中，用1.5ml甲苯处理15min。加

10ml20%蔗糖和10mlPH5.5醋酸盐-磷酸盐缓冲液，摇匀后放在

37℃恒温箱中培养24h

培养结束后，加50ml蒸馏水，摇荡后过滤。取20ml滤液移于100ml

三角瓶中，加10ml菲林溶液。在沸水浴上放置10min，冷却至室温

后再加3ml33%KI溶液和4mlHSO（1：3）。然后用0.1NNaSO

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滴定，至终点前加淀粉指示剂，再滴定至蓝色消失。试验应设以水

（20ml）代替基质的对照

蔗糖酶活性，用对照与试验的0.1NNaSO滴定毫升数之差表示

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β-glucosidaseβ-葡糖苷酶

HRP

淀而成。配制浓度为1%

（2）甲苯

（3）PH6.50.15M磷酸盐缓冲液

）铜-磷酸盐试剂：取28g无水KHPO和40g酒石酸钾钠，

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溶于700ml水中，加100ml1NNaOH，然后加入80ml

10%CuSO.5HO溶液。溶解后，加入180g无水NaSO，将溶液稀

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释至1L并过滤后备用

（5）0.005NKI

（6）2NHSO

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(7)0.005NNaSO。5HO溶液。该工作夜由0.1NNaSO原

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液稀释而成。为防止大气中CO2的影响，稀释1L溶液加2ml10%

NaOH

(8)木糖的标准溶液（1ml含0.2mg木糖）

4操作步骤

取5g土置于50ml三角瓶中，加2ml甲苯。10min后，