山东省艾滋病检测实验室操作规范(白).pptVIP

样本的保存*分离血清01即时检测的样品（1-2天内），可存放于2-8℃冰箱，最长时间一周。02如需长期保存，应将分离的血清或血浆存放于-20℃冰箱内。03选择合适的冻存管。04样品的运送*第45号部长高强中华人民共和国卫生部令《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》已于2005年11月24日经卫生部部务会议讨论通过，现予以发布，自2006年2月1日起施行。二○○五年十二月二十八日样品包装*1采用ＷＨＯ提出的三级包装系统。2第一层容器：装样品，要求防渗漏。样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的编号或受检者姓名、种类和采集时间。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。3第二层容器：要求耐受性好、防渗漏、容纳并保护第一层容器，可装多个第一层容器。将试管装入专用带盖的容器内，容器的材料要易于消毒处理。4第三层容器：放在一个运输用外层包装内，应易于消毒。外面要贴标签（数量，收、发件人）。第一层容器第二层容器第三层容器感染性样本的运输要求*安全运送：无损坏，不倾倒，无泄漏。必要条件：保证适宜温度，不受污染，及时运送：按时送到，不失时效无失误：无地址人名不清，造成错送或延误。感染性样本的运输要求*严格按照《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》和《全国艾滋病检测技术规范》的要求运送。01阳性样本填写《HIV抗体复检化验单》，用微机打印。送检单项目必须填写完全、规范。02除特殊需要外，一般不能用全血。03可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输包装标识*如有破损、渗漏或遗失请立即通知当地卫生行政部门联系人：联系电话：1.高致病性病原微生物危险标签高致病性病原微生物制冷剂：请勿自行打开2.高致病性病原微生物运输登记表3.外包装放置方向标识2、HIV实验室检测方法分类*一.抗体检测(IgG,IgM,IgA…)初筛实验ELISA(EIA)第四代胶体金/硒层析、渗滤明胶颗粒凝集凝集法确认实验蛋白印迹(WesternBlot,WB)免疫荧光(IFA)二.抗原检测(P24)三.核酸检测(RNA,DNA)四.病毒分离抗体检测*01020304抗体检测EIA（高敏感性）+WB（高特异性）诊断的准诊断的金标准：HIV特异性抗体检测确率大于99%，假阳性率约为0.0006%，造成错误诊断的机会几乎是0。05抗体检测唯一的问题是窗口期可以出现假阴性实验前试剂准备*1.观察外包装，内主份有无漏液，注意效期等。2.仔细阅读说明书，严格按照试剂说明书进行操作。3.操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟，保证酶等液体的初始反应温度及活性剂的溶解。4.核对样本编号5.检查孵育温度6.检查洗板机管道的畅通及程序7.一次性手套、隔离衣、口罩等8.消毒物品9.污物桶、缸10.做好试验原始记录*厂家方法包被抗原CUTOFF值阳性对照阴性对照条件北京万泰酶免未注明阴性均值NC+0.12Ⅰ，Ⅱ型各1孔≥0.83孔≤0.1北京金豪酶免gp41;gp36;ENV180.10+N(均值）2孔2孔小于0.02按0.02计算P小于0.5，N大于0.1实验无效安图绿科酶免未注明0.10+N(均值）2孔3孔P大于0.7，N小于0.1，P-N大于0.6实验无效英科新创酶免未注明0.10+N(均值小于0.05按0.05算）2孔2孔P大于N0.6以上，N小于0.1，实验有效珠海丽珠酶免未注明0.15+N(均值）2孔≥0.83孔≤0.12，≤0.08按0.08算阳性对照孔间差大于30%，实验无效英科新创胶体金gp120;gp41;gp3630分钟内判定结果上海科华胶体金gp160;gp41;gp36无30分钟内判定结果美国雅培层析法未注明最少15分钟最多60分钟判定结果加样过程应注意的问题*血清或血浆标本分离不好即进行加样。01漏加样品或加样量不足。02加液器的校正。03手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长。04温育过程中出现的问题及解决办法*1.温箱温育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗彻底；2.温育时间