高中生物精品资源高三一轮复习生物：PCR技术及其应用课件.pptxVIP

PCR技术及其应用基因工程

1.PCR技术的条件是什么？2.PCR反应包括哪几个过程？3.怎样鉴定PCR的产物？4.PCR技术有何应用价值？问题

1聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction），是一种体外复制DNA的技术，通过控制温度使复制过程反复进行。PCR技术体内DNA复制的基本条件有哪些？模板原料酶双链DNA4种脱氧核苷酸解旋酶DNA聚合酶DNA复制与PCR技术的基本条件在已有核酸链的3’端添加单个核苷酸引物短的单链核酸片段子链延伸方向？

1DNA复制与PCR技术的基本条件DNA聚合酶引物DNA复制方向聚合酶移动方向聚合酶移动方向子链延伸方向5’→3’

1聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction），是一种体外复制DNA的技术，通过控制温度使复制过程反复进行。PCR技术体内DNA复制的基本条件有哪些？模板原料酶双链DNA4种脱氧核苷酸解旋酶DNA聚合酶DNA复制与PCR技术的基本条件引物短的单链核酸片段高温耐高温[Taq酶]体外PCR技术1973年钱嘉韵设计特定引物获取目的基因

1请为下列目的基因选择引物序列，并说出子链延伸的方向。例题：DNA复制与PCR技术的基本条件引物2：←引物3：→

2PCR反应三步走DNA双链模板引物4种脱氧核苷酸变性90℃以上双链解开50℃左右引物结合复性72℃左右合成新链延伸循环原则碱基互补配对原则原理DNA的半保留复制

2PCR反应三步走DNA双链模板引物4种脱氧核苷酸变性复性延伸循环能量来源？用PCR可以扩增mRNA吗？

2PCR反应三步走1985年发明PCR技术1993年获得诺贝尔化学奖穆里斯(1944-2019)

2PCR反应三步走1.几轮循环后会出现只有目的基因片段的DNA分子？2.理论上讲，n个循环后，会出现多少个DNA片段？思考：3轮循环产物计算公式：2n

2PCR反应三步走1.PCR是一种体外迅速扩增DNA片段的技术，其基本原理和过程与细胞内DNA的复制类似。下列不是两者共同点的是（）①边解旋边复制②遵循碱基互补配对原则③需要引物④反应条件需要高温A．①② B．②③C．③④D．①④例题：D

2PCR反应三步走2.PCR过程一般经历下述三十多次循环：90℃以上使模板DNA变性解链→50℃左右复性（引物与DNA模板链结合）→72℃左右引物链延伸（形成新的脱氧核苷酸链）。下列有关PCR过程的叙述，不正确的是（）A．变性破坏的是碱基对之间的氢键B．引物与DNA模板链的结合依靠碱基互补配对原则完成C．延伸需要DNA聚合酶、ATP、四种核糖核苷酸D．PCR与胞内复制相比所需酶的最适温度较高例题：C

3PCR产物的鉴定凝胶电泳法电泳：DNA分子在电场作用下发生迁移,越小的DNA片段距离出发点越远.1234561.Marker：标准大小的DNA分子2：目的基因3-5：不同循环次数的PCR产物6：清水

4PCR技术的应用1.以DNA扩增为基础的应用（1）DNA鉴定谁是凶手

4PCR技术的应用1.以DNA扩增为基础的应用（1）DNA鉴定

4PCR技术的应用1.以DNA扩增为基础的应用（2）协助诊断图1为亨廷顿氏舞蹈症（HD，常染色体显性遗传病，随年龄增长发病，人群中罕见）家族成员系谱图，通过检测确定不同个体该基因的差异。电泳结果如图2所示，其中Ⅲ1为正常个体，据结果推测Ⅳ1___（有/无）出现HD症状的可能，依据是？有Ⅳ1与患者基因型一样，带有致病基因

4PCR技术的应用1.以DNA扩增为基础的应用（2）协助诊断肾上腺-脑白质营养不良是一种伴X染色体的隐性遗传病（用d表示），图为某患者家系图。（1）其中II-2的基因型是。XdY（2）科研人员提取家系中四名女性的DNA片段并进行PCR，产物酶切后进行电泳（正常基因含一个限制酶切位点，突变基因增加了一个酶切位点）。由图可知突变基因新增的酶切位点位于bp的DNA片段中。310

4PCR技术的应用1.以DNA扩增为基础的应用（2）协助诊断（3）已知女性细胞所含两条X染色体中的一条总是保持固缩状态而失活，推测失活染色体上的基因无法表达的原因是。肾上腺-脑白质营养不良是一种伴X染色体的隐性遗传病（用d表示），图为某患者家系图。固缩状态无法正常解旋转录分别提取四名女性的mRNA作为模板，后进行PCR，计算产物量的比例，结果如表1。逆转录

4PCR技术的应用1.以DNA扩增为基础的应用（2）协助诊断综合图表，推断II-3