实验1大肠杆菌的培养和分离.pptVIP

请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。培养细菌用的培养基与培养皿玻棒、试管、烧瓶和吸管实验操作者的双手答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。二操作步骤（一）制备LB培养基（通用的细菌培养基）1、配方：蛋白胨0.5克，酵母提取物0.25克，氯化钠0.5克，水50ml（配固体培养基再加琼脂1克）溶解计算称量调pH分装加塞，包扎2、流程灭菌倒平板①分装：注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，因此在将培养基转移到三角瓶或试管中时必须用__________。②加塞：试管用塑料盖或________；三角瓶口用_______或_________封口,再用_________或报纸封口。③包扎：用________或报纸三角漏斗棉花塞封口膜6层纱布牛皮纸牛皮纸高压蒸气灭菌法④灭菌1）加水：2）装锅：向外层锅内加入适量的水，加水的要求是_________.物品放置的要求______________________：加盖：将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的_______内。再以________方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。不触及内胆整齐、稳定、留出空隙排气槽两两对称3）加热排气：4）保温保压：5）出锅：打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的_______。_________________后，关上排气阀。当锅内压力升到_______kg/cm2时，控制热源，维持压力至______min。切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力降至____时，打开________，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。冷空气待冷空气完全排尽0115排气阀否则会因锅内压力较高，打开气阀后造成的压力差可能使容器内的培养基喷溅造成棉塞沾染培养基而发生污染，甚至使容器爆炸。灭菌后，通常将实验用具放入60℃~80℃_____中烘干，以除去灭菌时的水分，避免引起_____。烘箱污染倒平板：待培养基冷却至_____℃时，将每只培养皿倒入_________ml未凝固的固体培养基，置于_____位置上，轻轻晃动使其均匀铺满平皿底部，待凝，使之形成平面。_______备用。制斜面：将未凝固的固体培养基的试管____放，冷却待凝使即成为斜面。６０10～12水平倒置斜⑤倒平板、制斜面操作平台：灭菌好的培养基和实验器具置于超净台上打开_________和___________，灭菌30min.过滤风紫外线超净台思考题：A、操作过程中避免带入杂菌的方法有哪些？1、灭菌后的培养基、器具置于超净台上，并打开超净台的紫外灯和过滤风，灭菌30分钟。2、用镊子夹出洒精棉球擦拭桌面和实验者双手。3、整个操作在酒精灯火焰旁进行4、打开后或加塞前试管口、三角瓶口灼烧灭菌。B、培养基灭菌后，需要冷却到60后才倒平板，你用什么办法来估计培养基的温度呢？可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。思考题C、为何要将平板倒置？平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落培养基，造成污染。D、在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。E、如何检查培养基是否受杂菌的污染？将未接种的培养基放在恒温箱中培养，若无菌落产生则未受杂菌污染。（二）液体培养基接种培养主要器具：摇床接种环、摇床等３７灼烧冷却的接种环挑取少量菌种，放入三角瓶的液体培养基中，加塞。置于____℃摇床振荡培养１２小时。操作方法：先将接种环进行_____灭菌,______后01思考：如何冷却接种环？可通过接触试管内壁或未长菌的培养基达到冷却的目的。无菌操作：略02（三）平板划线分离法主要器具：操作过程：注意：无菌操作方法：同前。将培养皿______（盖在下），放于_____℃恒温培养箱中培养__________小时。在作第二次以及其后的划线操作时，要从上一次划线的开始________划线。接种环、思考：若如上图所示进行划线分离，则接种环总共进行几次灼烧灭菌？恒温培养箱。每次划线前接种环都要灼烧灭菌，再冷却。末端１２～２４倒置３７说明：（1）分布、与人类的关系、应用。注：EcoRⅠ来源于大杆菌E.c