人教版（2019）高中生物选择性必修3第3章第1节重组DNA技术的基本工具.pptxVIP

第3章基因工程第1节重组DNA技术的基本工具

图1棉花植株资料1：普通的棉花不具有抗棉铃虫的特性，虫害肆虐时，整个棉花植株被啃食得只剩下光秃秃的棉花秆。资料2：苏云金杆菌（Bacillusthuringiensis）的Bt抗虫基因可以表达出Bt抗虫蛋白，破坏棉铃虫的消化系统，从而杀死棉铃虫。思考：关于培育具有抗虫特性的棉花，你有什么想法？将Bt抗虫基因拼接（重组）到棉花的DNA上，产生抗虫性。图2棉铃虫

资料1：普通的棉花不具有抗棉铃虫的特性，虫害肆虐时，整个棉花植株被啃食得只剩下光秃秃的棉花秆。资料2：苏云金杆菌（Bacillusthuringiensis）的Bt抗虫基因可以表达出Bt抗虫蛋白，破坏棉铃虫的消化系统，从而杀死棉铃虫。思考：关于培育具有抗虫特性的棉花，你有什么想法？将Bt抗虫基因拼接（重组）到棉花的DNA上，产生抗虫性。图2棉铃虫图3抗虫棉一、重组DNA技术

思考：1.要将Bt抗虫基因与棉花DNA重组在一起，需要哪些操作步骤？

二、重组DNA技术的基本工具细菌噬菌体图4遗传学家H.O.Smith

二、重组DNA技术的基本工具1.请分析检测不到完整噬菌体DNA的原因检测不到完整的噬菌体DNA细菌中可能存在某种酶，从而破坏了噬菌体的DNA。图5噬菌体侵染细菌的流程示意图细菌噬菌体

二、重组DNA技术的基本工具（限制酶）1.限制性内切核酸酶----“分子手术刀”问：限制酶主要存在于原核细胞中，这对于原核细胞而言有何意义？限制酶的存在，是细菌在长期进化过程中形成了适应性防御机制，它可通过切割外源DNA而“限制”病毒入侵，以保证自身的安全。

二、重组DNA技术的基本工具1.限制性内切核酸酶----“分子手术刀”5′-GAATTC-3′3′-CTTAAG-5′EcoRⅠ5′-GGATCC-3′3′-CCTAGG-5′BamHⅠ5′-CTGCAG-3′3′-GACGTC-5′PstⅠ5′-GGGCCC-3′3′-CCCGGG-5′SmaⅠ思：仔细观察各识别区域中两条链的碱基排列顺序，你发现了什么规律？回文序列

探究实践包含抗虫基因的DNA片段限制酶限制酶说明书1.请大家在抗虫基因的两侧找到限制酶识别的序列，按说明书要求用剪刀（限制酶）剪开，之后与组内同学交流所剪切的片段。

EcoRⅠ探究实践

5533EcoRI二、重组DNA技术的基本工具1.限制性内切核酸酶----“分子手术刀”磷酸二酯键黏性末端

二、重组DNA技术的基本工具1.限制性内切核酸酶----“分子手术刀”5533EcoRI黏性末端SmaI5533平末端

二、重组DNA技术的基本工具1.限制性内切核酸酶----“分子手术刀”5533EcoRI黏性末端

二、重组DNA技术的基本工具2.DNA连接酶----“分子缝合针”图6DNA连接酶模拟结构图

二、重组DNA技术的基本工具2.DNA连接酶----“分子缝合针”自主学习：自主阅读教材P72第一段文字，找出两类DNA连接酶的来源和作用特点名称来源连接特点连接的化学键T4DNA连接酶E.coliDNA连接酶T4噬菌体大肠杆菌既能连平末端也能连黏性末端只能连黏性末端磷酸二酯键

二、重组DNA技术的基本工具3.载体----“分子运输车”质粒、噬菌体、动植物病毒

二、重组DNA技术的基本工具3.载体----“分子运输车”图7细菌与质粒示意图1967年，罗思(T.F.Roth)和海林斯基(D.R.Helinski)发现,细菌除拟核外还有一种环状DNA分子,即质粒，它具有以下特征：1.质粒存在复制原点，可在不同细胞内稳定存在并复制。2.质粒可以在细菌之间转移。

探究实践2.请找到质粒上合适的酶切位点，用已有的限制酶进行剪切。复制原点PBR322质粒二、重组DNA技术的基本工具3.载体----“分子运输车”一个至多个酶切位点

探究实践随机抽取1~2个片段，若末端可碱基互补配对，用装订机（DNA连接酶）连接起来，组内交流分析，一共能形成几种连接产物。注：有困难的话可开启锦囊混匀

探究实践随机抽取1~2个片段，若末端可碱基互补配对，用装订机（DNA连接酶）连接起来，组内交流分析，一共能形成几种连接产物。混匀相对于“单酶切”而言，“双酶切”连接效率更高

二、重组DNA技术的基本工具复制原点3.载体----“分子运输车”一个至多个酶切位点标记基因（四环素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因等）载体需要具备的三个条件PBR322质粒

影印平板法稀释涂布法含氨苄青霉素的培养基含四环素的培养基已导入重组质粒手把无菌绒布二、重组DNA技术的基本工具3.载体----“分子运输车”

二、重组DNA技术的基本工具图3抗虫棉

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