分析IA-IIB肺腺癌的特异性生物标志物的检测技术原理.pdf

分析IA-IIB肺腺癌的特异性生物标志

物的检测技术原理

摘要：根据流行病学统计，肺癌患者数量占据癌疮首位，并且死亡率高。所

以寻找癌症治疗方法迫在眉睫。在临床指南中，对于肺腺癌患者术后的治疗方案

非常模糊。术后无法进行有效的精准评估，并且复发频率高难以预测。其根本原

因是尚未发现患者的癌细胞特征驱动基因。因此追踪癌细胞的复制与进化产生的

不同癌细胞的类群显得格外重要。本文重点相继从组织水平，蛋白水平，RNA水

平，DNA水平上探讨特征化肺癌细胞进行分割化治疗。本文通过比较四种检测原

理明确在DNA水平上进行基因突变检测能够客观的研究癌细胞的生物学机制，从

而实现对IA-IIB肺腺癌进行分子分型。明确驱动基因和继发基因突变，为寻找

药物提供有力保障。手术后，对循环血液中残留肿瘤DNA进行深度测序，一次判

断患者身上的微小残留病灶的多少。以此来评估治疗疗效以及预测复发的可能性。

通过比较四个水平上的检测原理，发现只有DNA水平上进行基因检测最有前景，

可成为癌症精准医疗方法。

关键词：肺腺癌；检测技术原理；DNA突变；二代测序技术。

前言：根据流行病学统计，肺癌是最常见的实体瘤之一，每年有1.61百万

的患者，有1.38百万的患者死于肺癌。肺癌没有感染力和其传播途径。对于其

是否通过遗传方式传播也还是疑问。肺癌的首发大约是1-10年。复发期是0-5

年。其致死率极高，占中国所有癌症死亡人数的27%。肺癌已成为目前医疗领域

的主要负担，消耗大量的医疗资源。在我国的癌症病发率的统计中，有22.7%的

癌症患者属于肺癌。所以对于肺癌的研究与治疗对于人类至关重要。

（一）组织学常用检测技术原理及应用：

石蜡切片技术：是组织学中最常见的制片方法之一，用于观察组织细胞的结

构形态，以及研究组织细胞的形态变化。其主要步骤有：

1.采用适当化学液固定细胞，并维持其活细胞形态。

2.采用从低浓度到高浓度的无水乙醇处理样品，从而达到脱水的目标。

3.使用媒浸液将组织内的酒精置换出。

4.将组织样本放入熔化的石蜡中进行包埋。

5.完成包埋后，用切片机对样本进行切片。

6.将恒温水浴锅的温度设定在37C，展开切片，将展开的贴片放置在恒

温箱内干燥大约两小时，恒温箱温度设置为60C。

7.使用二甲苯中对切片进行脱蜡处理。一次使用95%、85%、70%浓度的酒精

对样品进行水化处理。整个过程大概需要耗时24h。

苏木精伊红染色技术：是病理组织学切片中最广泛使用的一种染色方法。苏

木精染色液体会与细胞核反应，将细胞核染色成深浅程度不一的蓝色。伊红染色

液体会与蛋白质上的氨基结合，将细胞胞浆染色长程度不一的红色。蓝色与红色

的细胞核形成鲜明对比，直观的观测到组织中细胞核的增值情况。苏木精伊红染

色有以下几个步骤。

1.将处理好的样品放入苏木素染色液中5-10分钟。

2.将样品浸在自来水中，洗去多余的染色液。

3.再用蒸馏水洗涤。

4.根据不同分化液体的分化时间进行分化。

5.用伊红染色样品，30s至2mins的范围内。

6.用70%乙醇洗涤2次，如需脱水、透明后封片按后续步骤进行，70%乙醇

洗涤后仍可按照后续步骤进行脱水、透明和封片处理。根据染色情况知道细胞核

与细胞质的比例，以此推测组织癌变情况。缺点是，只知道组织细胞形态，不知

道癌细胞的具体位置。

（二）蛋白质表达量

肿瘤标识物是指在肿瘤的发生和增值过程中生成的特定物质。通过测量血清

中肿瘤标识物的含量，可以有效的推断肿瘤在人体体内的发展情况。检测患者的

肿瘤标识物的水平有助于早期诊断，以及评估治疗效果。其中CA19-9属于重要

的肿瘤标识物。CA19-9的水平高低可以提醒手术难易程度，并且对术后的情况进

行有效评估。CA19-9检测技术，虽然可以检测肿瘤增长的程度，并且确定癌细胞

的特殊特征。但是无法检测基因层面。所以需要在更加细致的RNA层面上对癌症

进行检测。

（三）FISH技术

技术原理如下：RNA荧光原位杂交技术可以确定特定RNA序列。其技术的主

要步骤为：使组织切片进行逆转录生成DNA，使用核糖核酸酶H对