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牛血清在细胞培养中的作用与质量要求
生物技术已经被世界各国视为一种高技术，在整个科学技术中占据了特殊的显著地位，特别是生命科学的发展更?离不生物技术，生命科学的发展备受各国的重视。我国在很多大学中都设立了生命科学院。现代生物技术一般认?为包括基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术和发酵工程技术，而这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切?关系，特别是在医药领域的发展，细胞培养更具有特殊的作用和价值。比如基因工程药物或疫苗在研究生产过程?中很多是通过细胞培养来实现的。基因工程乙肝疫苗很多是以CHO细胞作为载体；细胞工程中更是离不细胞培养，?杂交瘤单克隆抗体，完全是通过细胞培养来实现的，既使是现在飞速发展的基因工程抗体也离不开细胞培养。正?在倍受重视的基因治疗、体细胞治疗也要经过细胞培养过程才能实现，发酵工程和酶工程有的也与细胞培养密切?相关。总之，细胞培养在整个生物技术产业的发展中起到了很关键的核心作用。细胞培养的发展，培养基的质量?又是关键，而培养基的主要成份中动物血清对细胞的生长繁殖发挥着重要甚至是难以替代的作用。在动物血清的?应用中牛血清又是最为广泛的，所以牛血清是医药生物技术产品中重要的原材料之一。保证牛血清质量也是促进?生物制品质量提高的重要环节。?
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一、牛血清在细胞培养基中的主要功能?
牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，具有极为重要的功能。??
1.提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。?
?2.提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物质活力。?
?3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。?
?4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。?
?5.起酸碱度缓冲液作用。?
?6.提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。?
?二、牛血清的主要成份?
血清是一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已为人所知，但还有一部分尚不清楚，而且血清组成及含量常?随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。??
1.蛋白质是牛血清中主要成份。除包括可携带金属离子、脂肪酸和自身是激素类蛋白外主要还有白蛋白，球蛋白。?纤维粘连素细胞促进细胞附着；?α2巨球蛋白抑制胰蛋白酶的作用；胎牛血清中含胎球蛋白促细胞附着；转铁蛋白能结合铁离子，减少其毒性?和被细胞利用。??
2.多肽：血小板促生长因子能促细胞分裂，是多肽家庭的主要成员之一，是主要的促细胞增殖因子；成纤维细胞?生长因子、表皮细胞生长因子、神经细胞生长因子等，血清中含量虽很少，但对细胞生长也有一定作用。??
3.激素：激素对细胞的作用是多方面的。?
胰岛素：促进细胞摄取葡萄糖和氨基酸，与促细胞分裂有关。?
类胰岛素生长因子：能与细胞表达的胰岛素受体结合，从而有胰岛素同样的作用。?
促生长激素：促细胞增殖效应。?
氢化可的松：血清中含有定量的该成分，它可能兼有促细胞贴附和增殖作用，但有人证明，血清中的氢化可的松?，如细胞密度高时可能有抑制细胞的作用和诱导其发生分化。??
4其他成份?
氨基酸、葡萄糖、酮酸等对多种营养成分的合成培养基意义不大。与蛋白相结合状态的微量元素对细胞培养有意?义。?
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三、牛血清的质量要求?
随着科学技术的发展和生活水平的不断提高对生物医药产品的质量要求也越来越高，所以对制备工艺中所涉及到?的各种原材料的质量标准要求也越来越高，特别是对用于细胞培养基中的主要天然成份――牛血清的质量要求也?不断提高。牛血清包括胎牛血清、新生牛血清和成牛血清。??
（一）、WHO公布的《用动物细胞体外培养生产生物制品规程》中的要求：??
1.牛血清必须来自有文件证明无牛海绵状脑病的牛群或国家。并应具备适当的监测系统。?
?2.有些国家还要求牛血清来自未用过反刍动物蛋白饲料的牛群。?
?3.证明所用牛血清中不含对所生产疫苗病毒的抑制物。?
?4.血清要通过滤膜过滤除菌，保证无菌。?
?5.无细菌、霉菌、支原体和病毒的污染，有些国家要求无细菌噬菌体污染。?
?6.对细胞有良好的支持繁殖作用。?
?（二）、我国在对牛血清的质量2000年版《中国生物制品主要原辅料质控标准》中提出比较严格的标准要求。包?括蛋白质含量，细菌、真菌、支原体、牛病毒、大肠杆菌噬菌体、细菌内毒素，支持细胞增殖检查。??
（三）、美国对牛血清的质量要求：Gibco和Sigma二家主要的美国牛血清供应商的牛血清都已进
4％血清／5个细胞／孔?
细胞培养基RPMI－1640，96孔培养盘36℃±2℃，5％二氧化碳培养10～?
15天。试验中选择一个已知参考牛血清作对照。?
克隆效率计算：?
克隆效率＝(阳性孔
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