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苹果树腐烂病抗性鉴定技术规范

1范围

本文件规定了苹果树腐烂病抗病性鉴定的术语和定义、接种体制备、鉴定条件和设计、鉴定接种、病情调查、抗性结果、鉴定结果、档案记录。

本文件适用于苹果生产过程中腐烂病的抗病性鉴定。

2规范性引用文件

本文件没有规范性引用文件。

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

接种体

用于接种以引起病害的任何病原物或病原物的一部分。

3.2

接种悬浮液

用于接种的含有定量接种体的液体。

3.3

接种室

指在无菌的环境下进行病原菌种扩繁、转接、接种的房间。

4接种体制备

4.1病原菌分离

从病斑边缘病健交界处剪取0.5cmx0.5cm大小的病组织，用75%乙醇消毒90s，然后用无菌水冲洗3次，用灭菌滤纸将水吸干，置于PDA培养基上，28℃恒温培养箱中培养，4℃下保存备用。苹果腐烂病菌的学名、形态特征和分子生物学特征见附录A。

4.2接种体繁殖

将保存的病原菌在PDA培养基上28℃培养10d～15d，待菌落表面形成分生孢子器。其中，PDA培养基配方为：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，蒸馏水1000mL。

4.3接种体悬浮液制备

2

用灭菌移植针挑取菌落表面形成的分生孢子器并破碎收集分生孢子，将分生孢子并用无菌水稀释配制成浓度约为1×106个孢子/mL的接种体悬浮液。

5鉴定条件和设计

5.1接种室

接种室为可人工调节湿度、温度和光照等条件，具体室温为25℃、光周期12h光照/12h黑暗、相对湿度35%～40%。

5.2鉴定设计

鉴定材料随机排列，每份鉴定材料重复3次，每重不低于10个枝条，以红富士健康树枝条接种腐烂病菌为对照。

5.3鉴定材料

田间采集用于抗性鉴定苹果品种的健康、长势一致、无侧枝2年生枝条，截取长度为150cm并两端蜡封。用自来水冲洗2次，75%酒精冲洗1次，无菌水冲洗1次，自然风干备用。

6鉴定接种

采用烫伤法接种，用直径5mm的钉帽在在备用鉴定材料上烫伤5个伤口，伤口间距25cm。每个伤口接种10μL接种悬浮液，完成后用保鲜膜包扎烫伤部位，接种4个伤口，1个伤口为对照。将完成接种的枝条扦插在装有细沙的花盆中，置于鉴定室培养。

7病情调查

7.1调查时间与方法

接种后5d调查发病情况，用刀片刮除枝条接种点周围树皮，测量病斑长度。接种苹果腐烂病菌的发病症状描述见附录A。

7.2病情级别

苹果离体枝条腐烂病病情级别见表1。

表1苹果离体枝条腐烂病病情级别

病情级别

严重度（mm）

0

不发病

1

5＜病斑长度≤10

3

10＜病斑长度≤15

5

15＜病斑长度≤20

7

20＜病斑长度≤25

9

病斑长度＞25

7.3病情指数计算

3

病情指数（DI）按式（1）计算。

Σ(各病情级别数值×各病情级别的病斑数)调查的总病斑数×病情级别的最高数值DI=×100·······················

Σ(各病情级别数值×各病情级别的病斑数)

调查的总病斑数×病情级别的最高数值

8抗性结果

依据病情指数(DI)的平均值确定不同品种对腐烂病的抗性水平，抗性结果见表2。表2苹果树腐烂病抗性结果

抗性结果

病情指数（DI）

免疫（I）

DI=0

高抗（HR）

0＜DI≤10

抗病（R）

10＜DI≤30

中抗（MR）

30＜DI≤50

感病（S）

50＜DI≤70

高感（HS）

DI＞70

注：对照感病品种的病情指数DI＞70作为有效性结果的依据。

9鉴定结果

鉴定结果原始记录表见附录B，鉴定结果报告单按附录C执行。

10档案记录

将鉴定品种、接种方法、接种日期、调查日期、操作员等内容填表记录，归档并保存2年。抗病性鉴定档案记录表见附录D。

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附录A（资料性）

苹果树腐烂病病原菌

A.1学名和形态描述

A.1.1学名

苹果树腐烂病病原学名为苹果壳囊孢（CytosporamaliGrove）、属子囊菌门（Ascomycota）、粪壳菌纲（Sordariomycetes）、间座壳目（Diaporthales）、壳囊孢科（Cytosporaceae）、壳囊孢属（CytosporaEhrenb.）。

A.1.2形态描述

苹果壳囊孢（CytosporamaliGrove）在PDA菌落白色至黄褐色、平展、边缘呈放射状，中央可产生乳白色分生孢子器。分生孢子器扁瓶形，直径为480μm～1600μm。分生孢子单孢、香蕉形、两端圆、微弯曲，大小（3.6μm～6μm）