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普通菜豆抗普通细菌性疫病田间鉴定技术规范

1范围

本文件规定了普通菜豆种质抗普通细菌性疫病田间鉴定的术语和定义、接种体制备、田间抗性鉴定、病情调查、抗性评价、接种鉴定后材料处理、鉴定记载表。

本文件适用于普通菜豆对普通细菌性疫病的田间抗性鉴定及评价。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB4404.2粮食作物种子第2部分：豆类

NY/T2060.1辣椒抗病性鉴定技术规程第1部分：辣椒抗疫病鉴定技术规程

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1

普通菜豆

豆科（Leguminosae），蝶形花亚科（Papilionoideae），菜豆族（Phaseoleae），菜豆属（Phaseolus）中的一个栽培种，一年生草本植物，学名PhaseolusvulgarisL.。英文名为Commonbean。染色体2n=22。

3.2

菜豆普通细菌性疫病

由地毯草黄单胞杆菌菜豆致病变种（Xanthomonasaxonopodispv.phaseoli）引起的以叶部形成有亮柠檬黄色边缘包围的不规则病斑，病斑合并导致大面积组织损伤，使叶片坏死、脱落，病株呈灼烧状为主的菜豆细菌性病害。该病害在菜豆的整个生育期内均可发生，病菌可侵染叶片、茎蔓、豆荚及种

子等产生不同病症。病原菌的生物学特性情况见附录A。

3.3

抗病性田间鉴定

将一定浓度病原菌悬浮液直接接种到田间植株的叶片、果实、茎秆及根等部位，依据植株的发病情况进行抗病性鉴定。

3.4

抗病性

2

植物体所具有的能够减轻或克服病原物致病作用的可遗传性性状。普通菜豆对普通细菌性疫病的抗病性依据病情指数划分为高抗、抗、中抗、感、高感五个抗性水平。

4接种体制备

4.1病原物的分离、纯化及保存

采集具有典型病斑的普通菜豆叶片或病荚，采用常规组织分离方法在牛奶吐温选择性培养基（成分及制备见附录B）上分离病原物。分离物经菌落形态鉴定确认为地毯草黄单胞杆菌菜豆致病变种后，进行分离物纯化，经致病性测定后，在4℃低温下保存备用。

4.2接种体

选用地毯草黄单胞杆菌菜豆致病变种作为抗病性田间鉴定的接种体。

4.3接种体的繁殖和保存

4.3.1繁殖

将将纯化的菌株于牛肉膏蛋白胨液体培养基（成分及制备见附录C）中，在28℃、200r/min条件下振荡培养48h，用灭菌蒸馏水稀释至菌液浓度为1×108cfu/mL，接种悬浮液用于田间接种。

4.3.2保存

挑取病原菌的单菌落接种于装有1mL牛肉膏蛋白胨液体培养基的菌种保藏管中，在28℃、200r/min条件下振荡培养过夜。离心后，加入50%灭菌甘油，在-80℃低温下保存备用。

5田间抗性鉴定

5.1鉴定圃选择

鉴定圃选择在普通细菌性疫病常发区，该区排灌方便、土地平整、肥力水平中等以上。

5.2鉴定圃设计

适期播种，鉴定材料随机或顺序排列，3次重复；每份材料播种3m2，行长3m，行宽0.5m，每行留苗15株，株距约0.2m。鉴定圃周围设保护行或保护区。

5.3鉴定材料要求

鉴定材料的种子质量应符合GB4404.2—20104.2.3中赤豆的要求，其中品种纯度符合大田用种要求。播种使用的种子大小、色泽均匀一致，不作物理或化学处理。

5.4鉴定对照品种

每10份～15份鉴定材料设1组已知抗病、感病对照材料。抗病对照品种为“洋菜豆（F0001292）”，感病对照品种为“黑金豆（F0001585）”。

5.5接种时期

植株生长到第1片三出复叶至开花期前期均可接种。

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5.6接种方法

人工接种鉴定采用喷雾接种法。用喷雾器对叶片上、下表面均匀喷雾，接种至整个植株完全湿润。

5.7接种后管理

接种后田间应充分灌溉，保证病菌的入侵、扩展。接种前后避免施用任何药剂。

6病情调查

6.1调查时间

病情调查于接种后20天左右，即感病对照病状达到其相应感病程度时进行。

6.2调查取样

每份鉴定材料棋盘式取样，田块均匀划成4个小区，每区随机取5株，共调查20株。

6.3调查部位

植株叶片和荚的外部症状。

6.4病情级别划分

接种植株病情分级及其相对应的症状描述见表1。

表1病情级别划分

病情级别

症状描述

0

没有可见症状。

1

局部可见轻微水渍状病斑；荚上没有病斑。

3

有少量小病斑，发病面积约占整叶的2%；一般荚上没有病斑。

5

小病斑开始合并，有的被黄色晕圈包围，轻微枯萎，发病面积约占整叶的5%；荚上病斑小，不合并。

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