DB32T 2571-2013 鸡传染性支气管炎RT-LAMP 诊断技术规程.pdfVIP

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B22

备案号：40457-2014DB32

江苏省地方标准

DB32/T2571-2013

鸡传染性支气管炎RT-LAMP诊断技术规程

TechnicalcodeofdetectingRT-LAMPforInfectiousBronchitis

2013-12-20发布2014-01-20实施

江苏省质量技术监督局发布

DB32/T2571-2013

前言

为规范鸡传染性支气管炎RT-LAMP诊断技术规程，提高鸡传染性支气管炎病毒检测的灵敏度、稳定

性、特异性，特制定本标准。

本标准按GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》要求编写。

本标准的附录为规范性附录。

本标准由江苏省农业科学院提出。

本标准起草单位：江苏省农业科学院。

本标准起草人：刘宇卓、李银、黄欣梅、赵冬敏、韩凯凯、张敬峰。

DB32/T2571-2013

鸡传染性支气管RT-LAMP诊断技术规程

1范围

本标准规范了鸡传染性支气管炎RT-LAMP诊断技术所用引物大小、所涉及的样品范围、操作流程、

反应条件等技术标准。

本标准适用于鸡传染性支气管炎的实验室诊断、临床诊断、流行病学调查、分离毒株的鉴定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB16548-2006病害动物和病害动物产品生物安全处理规程

GB/T23197-2008鸡传染性支气管炎诊断技术

NY/T541-2002动物疫病实验室检验采样方法

3主要试剂和仪器

3.1DNAMarkerDL-2000

3.26xLoadingbuffer

3.3BstDNAPolymerase

3.4MgSO4

3.5DEPC

3.6Betaine

3.7lOXThermoPolbuffer

3.8异丙醇

3.9无水乙醇

3.10琼脂糖

3.11核酸染料

3.12氯仿

3.13电泳仪

3.14电热恒温水槽

4引物

按照GenBank上公布的鸡传染性支气管病毒（IBV）衣壳蛋白M基因序列保守区域，应用在线LAMP

primerdesigningsoftwarePrimerExplorer设计一套引物，序列如下：

F3：5′一AAGGATTTGGCCCTCGTA一3′；

FIP：5′一TGTAACACGCCCATCATAATTCCTAAGAAGGGAAATTTTGGTGAT一3′；

BIP：5′一CTCATGCTTGTCTTTTTGGAAGTAGCAGTAGTAAATTCAAATCTAAGGTG一3′；

B3：5′一CTGCGGGTCATCTCTAGG一3′。

1

DB32/T2571-2013

2

ddH0溶解成25Pmo1/ul后分装，一20℃冰箱保存备用。

5临床诊断

按照GB/T23197-2008鸡传染性支气管炎诊断技术方法进行临床诊断。

6采样和样品的处理

6.1病料的采集及处理

按照NY/T541-2002动物疫病实验室检验采样方法，采集病料后，于0～4℃冷藏保存并立即送检，

采样