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噬菌体或病毒DNA大肠杆菌的l噬菌体DNAl-DNA载体的构建：加装选择标记lacZlacZ基因编码b-半乳糖苷酶，能催化无色的X-gal生成蓝色化合物。当外源基因插入到lacZ基因中，基因灭活，不能合成蓝色化合物；而空载体l-DNA则产生蓝色透明斑噬菌体或病毒DNA外源基因l-DNA作为载体的优点：大肠杆菌的l噬菌体DNAl-DNA可在体外包装成噬菌体颗粒，能高效转染大肠杆菌l-DNA载体的装载能力为25kb，远远大于质粒的装载量重组l-DNA分子的筛选较为方便l-DNA载体适合克隆和扩增外源DNA片段，但不适合表达重组l-DNA分子的提取较为简便贰壹叁噬菌体或病毒DNA大肠杆菌的M13单链噬菌体DNAM13噬菌体的生物学特性：生物结构M13噬菌体的外型呈丝状M13噬菌体由外壳包装蛋白和正链DNA组成M13DNA全长6407个核苷酸M13DNA上至少有10个基因2700个外壳蛋白分子M13噬菌体不裂解宿主细胞，但抑制其生长噬菌体或病毒DNA斑的混浊度亦越大使克隆的DNA片段以特定单链的形式输出受体细胞外这在DNA定向突变中非常有用被M13噬菌体感染的受体细胞生长缓慢，形成混浊斑，易于辨认挑选。而且重组分子越大，混浊但M13-DNA载体的最大缺陷是装载量小，只有1.5kbM13重组分子筛选简便M13DNA载体的特点：大肠杆菌的M13单链噬菌体DNA01与动植物受体细胞相适应的载体一般选择相应动植物的病02毒基因组DNA。03动植物病毒种类繁多，每一种动植物都有多种特异性的病04毒。按照基因组的结构，可将动植物病毒分成四大类：05单链DNA病毒06双链DNA病毒07单链RNA病毒08双链RNA病毒09RNA病毒在自我复制时大多存在相应的DNA中间反应物，10这些中间体可作为载体进行常规的DNA重组。噬菌体或病毒DNA0102030405病毒载体：CaMV克隆载体在插入外源DNA厚会失去病毒感染性，不能直接感染植物。花椰菜花叶病毒组（CaMV）特点：唯一以双链DNA做为遗传物质的植物病毒，共12种病毒。烟草花叶病毒（TMV）克隆载体单链RNA，6395bp特点：复制量和外壳蛋白表达量高，寄主范围广，能在整株植物上快速扩散常用作植物表达克隆载体12SV40克隆载体——哺乳动物基因克隆载体（猿猴空泡病毒40）SV40基因组双链闭环DNA：5243bpSV40-DNA复制与增殖猿猴细胞——受纳细胞嚙齿动物（小鼠、仓鼠）——非受纳细胞；细胞癌变人：1～2%细胞产生病毒颗粒，不会插入染色体，相对安全三、穿梭载体（shuttlevector）带有原核和真核细胞的复制起始点常将真核生物的克隆载体构建成穿梭载体，使其先在大肠杆菌中扩增，将目的基因与之构成合适的重组体后，再转入真核细胞若加上适当的真核启动子等元件，则成为真核表达载体，能在真核细胞中表达插入载体中的外源基因010302三、穿梭载体（shuttlevector）真核系统载体还必需具备适当的筛选标记一种筛选标记是，使用遗传缺陷型细胞株与载体的基因产物互补（如TK基因产物）。另一种普遍使用的是抗新霉素基因。因此，真核克隆载体的构成一般由来自噬菌体、质粒和病毒的DNA元件构建而成。12三、穿梭载体（shuttlevector）逆转录病毒载体01SV40（猿猴病毒）载体02SV40（猿猴病毒）载体真核表达载体中的调控元件大都来源于SV40的调控顺序和复制信号用SV40作为载体有两种方式用SV40DNA与外源DNA构建重组子，转染细胞后允许细胞形成含外源DNA的病毒颗粒；重组子不包装成病毒颗粒，而象质粒一样在细胞中复制或整合到染色体组中。三、穿梭载体（shuttlevector）例：PSVK3质粒PSVK3是一类广泛适用于哺乳动物细胞系表达外源基因的穿梭载体。三、穿梭载体（shuttlevector）RNA修饰信号：①SV40小T抗原拼接信号；②SV40早期区mRNApolyA加尾信号。03多克隆位点：SV40启动子下游有8个酶切位点。04原核系统构件：①复制子和丝状噬菌体复制起始位点fl;②筛选标志（Ampr）；③启动子（T7启动子）。01真核系统构件：①SV40复制起始点；②SV40早期启动子02PSVK3具有下列构件：logo三、穿梭载体（shuttlevector）pSVK3质粒三、穿梭载体（shuttlevector）逆转录病毒载体1逆转录病毒载体具有