HPLC加样回收率试验怎么做8658.pdf

现在一般都用第二种方法，又分两种添加方法：

1添加样品中含量一半的80%、100%和120%，每个两份

2添加样品中含量一半的50%、100%和150%，每个两份。这两种都可以的

计算时添加后测得的含量与原来样品的含量一半之差作分子，添加的含量做分母，并计算这

6个结果的RSD，小于3%即可。

验证内容有：

准确度、精密度(包括重复性、中间精密度和重现性)、专属性、检测限、定量限、线性、范

围和耐用性。视具体方法拟订验证的内容。附表中列出的分析项目和相应的验证内容可供参

考。

方法验证内容如下

一、准确度

正确度系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般以回收率(%)表示。准

确度应在规定的范围内建立。

1．含量测定方法的准确度

原料药可用已知纯度的对照品或样品进行测定，

或用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测定的结果进行比较。

制剂可用含已知量被测物的各组分混合物进行测定。

如不能得到制剂的全部组分，

可向制剂中加入已知量的被测物进行测定，

或与另一个已建立准确度的方法比较结果。

如该法已建立了精密度、线性和专属性，

准确度有时也能推算出来，不必再做。

2．杂质定量测定的准确度

可向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定。

假如不能得到杂质或降解产物，

可用本法测定结果与另一成熟的方法进行比较，

如药典标准方法或经过验证的方法。如不能测得杂质或降解产物的相对响应因子，则可用原

料药的响应因子。

应明确证实单个杂质和杂质总量相当於主成分的重量比(%)，或是面积比(%)。

3．数据要求

在规定范围内，至少用9次测定结果进行评价，

例如制备3个不同浓度的样品，各测定3次。

应报告已知加入量的回收率(%)，或测定结果平均值与真实值之差及其可信限。

所以加样回收率反映的是方法的准确度，

是评价方法好坏的指标这一，是误差理论在药物质量标准中的具体应用。

准确度=(测量值-真实值)/真实值*100%。

实际工作中，其实不存在药物的真实值的

(我们所有的数据都是测量值，都是人们用一定的方法测出来的)。其他领域也一样。

於是人们找一种比较可靠的得到的值规定为真实值。这就是加样回收率的方法。

比如，为了评价阿司匹林片剂的含量测定方法，用天平称一定量(如：100mg)的对照品，加

入到阿司匹林的片剂辅料中，这一定量的对照品就是真实值。用建立的方法测出来是99mg，

这个方法的准确度就是99%，或加样回收率是99%，根据药品的具体情况，当这个回收率达

到一定范围时(比如99%-101%)就认为方法是准确的。

关于加样回收率的讨论已有报道［１－３］，虽对加样回收率的两种计算方法均从不同侧面

做了较透彻的讨论与选择，但均忽略了原样品（实际样品）中待测组分含量确定的方法及

其误差性质对回收率结果可靠性的影响，有必要做进一步的探讨作为补充。设原样品中待测

组分的真实量为Ｘｏ，待测组分纯品标准加入的真实量为Ｙｏ，为统一讨论，我们把Ｙｏ的

获得及加入过程也看为一种测量，那么，Ｘｏ、Ｙｏ及其总量的测得量分别为Ｘ、Ｙ和Ｚ，

它们的测量误差分别为ＥＸ、ＥＹ和ＥＺ，则目前回收率Ｒ有如下两种计算方法依据测得

Ｘｏ的方法不同分以下两种情况讨论。

１成熟方法包括药典法及可靠的文献法。

由于选用的方法成熟可靠，测量误差小，则ＥＸ可忽略，而且Ｙｏ的获得及加入过程一般

是可靠的，Ｅｙ亦可忽略，则（１）、（２）式可分别简化为（３）、（４）式：两式中，Ｒ

唯一地与测量误差ＥＺ相关，理论上讲，可以用来检验拟订方法的准确度。２拟订方法同

上讨论，Ｅｙ可以忽略，但由于Ｘ０是按拟订方法测得的，故ＥＸ不可盲目忽略，则（１）、

（２）式可分别简化为（５）、（６）式：Ｒ并不唯一地与ＥＺ相关，还与测定原样品中Ｘ

ｏ的误差ＥＸ有关，是否可以用来检验拟订方法的准确度需要做进一步的讨论。测量误差

按其性质分为两类：偶然误差和系统误差，系统误差又包括恒定误差和比例误差。偶然误

差可以通过增加试验次数来消除，本文不做更深讨论，而系统误差却会给测定带来固定方向

的偏差。

２．１系统误差为恒定误差：此时ＥＸ＝ＥＺ，所以（５）、（６）式可写为（７）、（８）

式：即在该情况下，无论拟订方法的误差多大，回收率均为１００％。结果显然是不可靠的。

２．２系统误差为比例误差：设比例误差的比例系数为Ｅ，则ＥＸ＝Ｅ·Ｘｏ，ＥＺ＝Ｅ·（Ｘ

ｏ＋Ｙｏ），则（５）、（６）式可分别写成（９）、（１０）式：回收率的实质是单位真实量

的测得量，而Ｅ是单位真实量的测量误差，所以Ｒ应等于１＋Ｅ