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课题2多聚酶链式反应扩增DNA片段
课前预习
情景导入
1995年,美国科学家Mulis众望所归地获得了诺贝尔化学奖,他所取得的成就是发明了PCR技术。这种技术一问世,立刻引起了分子生物学研究的一场革命,人们利用这种轰动全世界的技术很快就把微观领域的生物学研究大大地往前推进了一步。PCR在人类社会生活中的应用越来越广泛。比如,科学家们只需要一根头发甚至一个细胞就可以完成“DNA指纹”的鉴定工作,这里实际上就要采用PCR技术,因为一个细胞中的DNA含量实在太少了,人们根本不可能检测到它的指纹;有了PCR技术就好办了,通过PCR技术把这个细胞中的DNA片段扩增1000万倍,这样DNA量就足够作指纹鉴定了。本课题我们就来学习一下PCR的有关知识.
知识预览
一、基础知识
1。PCR原理
(1)体外进行DNA复制时,参与的组分:、、4种脱氧核苷酸、以及。
(2)DNA的方向:3′端为羟基(—OH)末端,磷酸基团末端为5′端.
(3)DNA合成的方向:从子链的向延伸.
(4)变性:在的温度范围内,DNA的将解体,双链分开,这个过程称为变性.当温度后,两条彼此分离的DNA链又会重新结合成.
PCR利用了,通过控制来控制双链的与结合。
(5)DNA聚合酶:耐高温的。
综上所述,PCR反应需要在一定的缓冲液中提供,分别与_____________的两种引物,四种脱氧核苷酸,耐热的,同时通过使DNA复制在体外反复进行。
2.PCR的反应过程
PCR一般要经历三十多次循环,每次循环可以分为、和三步.从第二轮循环开始,上一次循环的产物也作为参与反应,并且由延伸而成的DNA单链会与结合,进行DNA的。
答案:1.(1)解旋酶DNA母链DNA聚合酶引物(3)5′3′(4)80~100℃双螺旋结构缓慢降低双链DNA的热变性原理温度解聚(5)DNA聚合酶DNA模板两条模板相结合DNA聚合酶控制温度
2.变性复性延伸模板引物Ⅰ引物Ⅱ延伸
二、实验操作
在实验室中,做PCR通常使用,具体操作时用。
答案:微量离心管微量移液器
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