紫外可见分光光度法.ppt

*光电倍增管是检测微弱光最常用的光电元件，它的灵敏度比一般的光电管要高200倍，因此可使用较窄的单色器狭缝，从而对光谱的精细结构有较好的分辨能力。（五）信号指示系统它的作用是放大信号并以适当方式指示或记录下来。常用的信号指示装置有直读检流计、电位调节指零装置以及数字显示或自动记录装置等。很多型号的分光光度计装配有微处理机，一方面可对分光光度计进行操作控制，另一方面可进行数据处理。3-6紫外-可见分光光度计第58页,共84页，5月，星期六，2024年，5月*二、紫外-可见分光光度计的类型紫外-可见分光光度计的类型很多，但可归纳为三种类型，即单光束分光光度计、双光束分光光度计和双波长分光光度计。1单光束分光光度计经单色器分光后的一束平行光，轮流通过参比溶液和样品溶液，以进行吸光度的测定。这种简易型分光光度计结构简单，操作方便，维修容易，适用于常规分析。2双光束分光光度计经单色器分光后经反射镜分解为强度相等的两束光，3-6紫外-可见分光光度计第59页,共84页，5月，星期六，2024年，5月*一束通过参比池，一束通过样品池。光度计能自动比较两束光的强度，此比值即为试样的透射比，经对数变换将它转换成吸光度并作为波长的函数记录下来。双光束分光光度计一般都能自动记录吸收光谱曲线。由于两束光同时分别通过参比池和样品池，还能自动消除光源强度变化所引起的误差。3双波长分光光度计由同一光源发出的光被分成两束，分别经过两个单色器，得到两束不同波长（?1和?2）的单色光；3-6紫外-可见分光光度计第60页,共84页，5月，星期六，2024年，5月*利用切光器使两束光以一定的频率交替照射同一吸收池，然后经过光电倍增管和电子控制系统，最后由显示器显示出两个波长处的吸光度差值ΔA（ΔA=A?1-A?2）。对于多组分混合物、混浊试样（如生物组织液）分析，以及存在背景干扰或共存组分吸收干扰的情况下，利用双波长分光光度法，往往能提高方法的灵敏度和选择性。利用双波长分光光度计，能获得导数光谱。通过光学系统转换，使双波长分光光度计能很方便地转化为单波长工作方式。如果能在?1和?2处分别记录吸光度随时间变化的曲线，还能进行化学反应动力学研究。3-6紫外-可见分光光度计第61页,共84页，5月，星期六，2024年，5月*它可用来进行在紫外区范围有吸收峰的物质的检定及结构分析，其中主要是有机化合物的分析和检定，同分异构体的鉴别，物质结构的测定等；另一方面，如果物质组成的变化不影响生色团及助色团，就不会显著地影响其吸收光谱，因此物质的紫外吸收光谱基本上是其分子中生色团及助色团的特性，而不是它的整个分子的特性。§3-7紫外吸收光谱的应用第62页,共84页，5月，星期六，2024年，5月*所以，单根据紫外光谱不能完全决定物质的分子结构，还必须与红外吸收光谱、核磁共振波谱、质谱以及其它化学的和物理化学的方法共同配合起来，才能得出可靠的结论。第63页,共84页，5月，星期六，2024年，5月*当然，紫外光谱也有其特有的优点。例如具有π键电子及共轭双键的化合物，在紫外区有强烈的K吸收带，其摩尔吸收系数可达104～105L·mo1-1·cm-1，检测灵敏度很高(红外吸收光谱的ε很少超过103L·mo1-1·cm-1)，因而紫外吸收光谱的λmax和εmax还是能像其它物理常数，如熔点、旋光度等一样，可提供一些有价值的定性数据。其次，紫外吸收光谱分析所用的仪器比较简单而普遍，操作方便，准确度也较高，因此它的应用是很广泛的。§3-7紫外吸收光谱的应用第64页,共84页，5月，星期六，2024年，5月*1．定性分析以紫外吸收光鉴定有机化合物时，通常是在相同的测定条件下，比较未知物与已知标准物的紫外光谱图，将两者的谱图相同，则可认为待测试样与已知化合物具有相同的生色团。如果没有标准物，也可借助了标准谱图或有关电子光谱数据表进行比较。§3-7紫外吸收光谱的应用第65页,共84页，5月，星期六，2024年，5月*但应注意，紫外吸收光谱相同，两种化合物有时不一定相同，因为紫外吸收光谱常只有2～3个较宽的吸收峰，具有相同生色团的不同分子结构，有时在较大分子中不影响生色团的紫外吸收峰，导致不同分子结构产生相同的紫外吸收光谱，但它们的吸光系数是有差别的，所以在比较λmax的同时，还要比较它们的εmax§3-7紫外吸收光谱的应用第66页,共84页，5月，星期六，2024年，5月*2.有机化合物