《生物技术制药》第二章基因工程制药-5.pptx

BiotechnologicalPharmaceutics基因工程制药基因工程制药GeneEngineeringforPharmaceutics（五）

BiotechnologicalPharmaceutics基因工程制药1.简述大肠杆菌基因表达产物的分离纯化。2.基因工程药物分离纯化的一般流程。3.分离纯化目的产物的四类色谱分离技术的原理及选择原则。

BiotechnologicalPharmaceutics基因工程制药第七节基因工程药物的质量控制一、原材料的质量控制确保编码药品的DNA序列的正确性，重组微生物来自单一克隆，所用质粒纯而稳定，以保证产品质量的安全性和一致性。

BiotechnologicalPharmaceutics基因工程制药一、原材料的质量控制（1）明确目的基因的来源、克隆经过，并以限制性内切酶图谱和核苷酸序列等予以确证；（2）提供表达载体的名称、结构、遗传特性及其各组成部分（如启动子、复制子）的来源与功能，构建中所用位点的酶切图谱，抗生素抗性标志物；

BiotechnologicalPharmaceutics基因工程制药（3）提供宿主细胞的名称、来源、传代历史、检定结果及其生物学特性；（4）阐明载体引入宿主细胞的方法及载体在宿主细胞内的状态，如是否整合到染色体内及在其中的拷贝数，并证明宿主细胞与载体结合后的遗传稳定性；一、原材料的质量控制

BiotechnologicalPharmaceutics基因工程制药（5）提供插入基因与表达载体两侧端控制区的核苷酸序列，详细叙述在生产过程中，启动与控制克隆基因在宿主细胞中表达的方法及水平等。一、原材料的质量控制

BiotechnologicalPharmaceutics基因工程制药在工程菌菌种贮存中，要求种子克隆纯而稳定；在培养过程中，要求工程菌所含的质粒稳定，始终无突变；在重复生产发酵中，工程菌表达稳定；始终能排除外源微生物污染。二、培养过程的质量控制

BiotechnologicalPharmaceutics基因工程制药（1）生产基因工程产品应有种子批系统，并证明种子批不含致癌因子，无细菌、病毒、真菌和支原体等污染，并由原始种子批建立生产用工作细胞库；（2）原始种子批须确证克隆基因DNA序列，详细叙述种子批来源、方式、保存及预计使用期，保存与复苏时宿主载体表达系统的稳定性；二、培养过程的质量控制

BiotechnologicalPharmaceutics基因工程制药（3）对生产种子，应详细叙述细胞生长与产品生成的方法和材料，并控制微生物污染；（4）提供培养生产浓度与产量恒定性数据，依据宿主细胞-载体系统稳定性，确定最高允许传种代数；二、培养过程的质量控制

BiotechnologicalPharmaceutics基因工程制药（5）培养过程中，应测定被表达基因分子的完整性及宿主细胞长期培养后的基因型特征；以宿主细胞-载体稳定性与产品恒定性，规定持续培养时间，并定期评价细胞系统和产品；二、培养过程的质量控制

BiotechnologicalPharmaceutics基因工程制药（6）培养周期结束时，应检测宿主宿主细胞载体系统的特性，如质粒拷贝数、宿主细胞中表达载体存留程度，含插入基因载体的酶切图谱等。二、培养过程的质量控制

BiotechnologicalPharmaceutics基因工程制药三、纯化工艺中的质量控制1、产品要有足够的生理和生物学试验数据，确证提纯物分子批间保持一致性；外源蛋白质、DNA与热原质都控制在规定限度以下。2、在精制过程中能清除宿主细胞蛋白质、核算、糖类、病毒、培养基成分及精制工序本身引入的化学物质，并有检测方法。

BiotechnologicalPharmaceutics基因工程制药四、目标产品的质量控制电泳方法：SDS,等电聚焦，免疫电泳免疫学方法：RIA,RIDELISA,Immunoblotting受体结合实验（ReceptorBinding）各种高效液相分析法（HPLC）肽图分析法EdmanN末端序列分析法圆二色谱（CD）NMR1、产品的鉴别表3重组蛋白质