《生物技术制药》第7章2优良菌种的选育.pptx

7.2优良菌种的选育1新药生产菌种的选育2菌种保藏3菌种库建立与质量控制发酵制药生产菌种的建立

自然分离目的：出发菌的获取样品的采集：大陆表层土壤，海洋水体预处理：根据分离目的和微生物的特性。温度；化学处理；离心、膜过滤培养基：选择性，营养和pH；添加抑制剂。分离方法：（1）稀释法：无菌水，生理盐水，缓冲液（2）滤膜法：细菌在膜上，放线菌进入培养基。培养条件：温度。放线菌：25－30℃，32－37℃，45－50℃；7－14天至1月。发酵制药生产菌种的建立

诱变育种概念：人为创造条件（诱变剂处理），使菌种发生变异，筛选优良个体，淘汰劣质个体。物理类：紫外线，快中子，激光，太空射线。化学类：碱基类似物，嵌合剂，亚硝酸。生物类：噬菌体，转座子。特点：快速，简单，效益大。缺点：无定向性，大量筛选。发酵制药生产菌种的建立

原生质体融合育种概念通过化学或物理学的方法，使两个不同种类的体细胞融合在一起，形成杂合细胞，产生兼具两个亲本遗传性状的新细胞。特点：有一定的定向性，效果显著。发酵制药生产菌种的建立

d.筛选，鉴定e.高产菌株a.原生质体制备：用去壁酶处理将微生物细胞壁除去，制成原生质体。操作过程hybridcellc.细胞壁再生b.原生质体融合：异核体或重组子菌株1菌株2去细胞壁原生质体1原生质体2高渗，PEG处理杂合原生质体发酵制药生产菌种的建立

菌种保藏原因：菌种经过多次传代，会发生遗传变异，导致退化，从而丧失生产能力甚至菌株死亡。目的：保持菌种原有优良特性，延长生命时限，长期存活、不退化，不污染，随时为生产供菌。原理：使菌种代谢处于不活跃状态，即生长繁殖受抑制的休眠状态。措施：物理和化学方法（温度：低温；水分：干燥；氧气：缺氧；营养；缺乏）发酵制药生产菌种的建立

保藏方法比较方法名称主要措施适宜菌种保藏期评价冰箱保藏法（斜面）冰箱保藏法（半固体）石蜡油封藏法沙土保藏法冷冻干燥法低温低温低温、缺氧干燥、无营养干燥、无氧、低温、有保护剂各类细菌、酵母菌各类产孢子微生物各类3－6月6－12月1－2年1－10年5－15年以上简便简便简便简便有效简便有效发酵制药生产菌种的建立

菌种库建立与质量控制依据：建立各级种子细胞库，实施种子批系统管理，进行验证确保菌种的稳定、无污染，保证生产正常有序进行。发酵制药生产菌种的建立

建库的流程WCBQCWCBQCQCMCB新菌种或细胞系原始培养物QC质保实验室，繁殖保存实验室，繁殖主菌种库MCB：来源于原始菌种或细胞培养物工作菌种库WCB：由主菌种库或主细胞库繁殖而来。发酵制药生产菌种的建立

保藏机构－中国中国典型培养物保藏中心:ChinaCenterforTypeCultureCollection(CCTCC)。中国科学院典型培养物保藏委员会,下设9个库中国普通微生物菌种保藏管理中心：ChinaGeneralMicrobiologicalCultureCollectionCenter(CGMCC)，微生物所（真菌和细菌）；武汉所（病毒）抗生素菌种保藏管理中心（CACC）：中国医学科学院抗生素所，四川抗生素所，华北制药集团抗生素所发酵制药生产菌种的建立

保藏机构－国外WFCC：Worldfederationforculturecollections,http://www.wdcm.riken.go.jp/wfcc.thml美国的典型菌种保藏中心ATCC:AmericanTypeCultureCollection,/日本发酵研究所IFO:InstituteforFermentation,Osaka,Japan英国国家典型菌种保藏所NCTC:NationalCollectionofTypeCulture,London,UK发酵制药生产菌种的建立

127.3发酵的基本过程菌种种子制备发酵发酵液预处理提取精制Fermentationengineering

137.4发酵的方式根据对氧的需要区分：厌氧和有氧发酵根据培养基物理性状区分：液体和固体发酵根据从微生物生长特性区分：分批发酵和连续发酵Fermentationengineering