《医学免疫学》第22章免疫学检测技术的基本原理.pptx

第二十二章

免疫学检测技术的基本原理;目的要求;免疫学检测是借助免疫学、细胞生物学和分子生物学理论或技术，对抗原、抗体、免疫细胞、细胞因子及CD分子、黏附分子等进行定性、定量或定位检测。

随着现代免疫学及其相关学科的进展，免疫学检测技术已成为当今生命科学主要的研究手段之一，为基础和临床医学的发展及疾病的诊断、预后、防治和药物疗效评价提供了重要的方法和手段。;细胞水平：根据各类免疫细胞（T,B,NK,Mφ）膜表面所表达的独特标志极其特殊功能，在体内或体外测定各类细胞及其亚群的数量和功能，了解机体的免疫应答水平。

分子水平：各类Ig、补体、CK及其受体、粘附分子表达水平及其活性，了解各种免疫分子间的相互关系。

基因水平：测定免疫应答相关基因的表达与调控、免疫分子遗传多态性以及基因型别分析。;第一节体外抗原抗体结合反应的特点及影响因素;;抗原与抗体结合发生反应的物质基础是抗原的决定基与抗体的抗原结合部位之间的结构互补性。;抗原表位的性质、数目、位置、空间排列和立体构象决定着抗原-抗体反应的高度特异性。;2.表面化学基团之间的可逆结合;解离度的影响影响因素;3.适宜的抗原抗体浓度和比例;在最适比反应条件下，抗原抗体几乎全部结合形成肉眼可见的反应，上清液中基本无游离的抗原和抗体。

抗原与抗体分子比例合适的范围称为抗原抗体反应的等价带;因抗原抗体比例不合适而不出现可见反应，称抑制带。

其中抗体过量时，称为前带；抗原过量时，称为后带。;4.抗原抗体反应的两个阶段;可见反应阶段

需时较长，数分，数小时或数日出现可见现象，易受电解质、温度和酸碱度的影响。;电解质

温度

酸碱度

其他;电解质（离子强度）：

抗原与抗体发生特异性结合后，虽由亲水胶体变为疏水胶体，若溶液中无电解质参加，仍不出现可见反应。

为了促使沉淀物或凝集物的形成，常用0.85％氯化钠或各种缓冲液作为抗原及抗体的稀释液。由于氯化钠在水溶液中解离成Na+和C1－，可分别中和胶体粒子上的电荷，使胶体粒子的电势下降。

当电势降至临界电势（12～15mV）以下时，则能促使抗原抗体复合物从溶液中析出，形成可见的沉淀物或凝集物。;酸碱度（pH）：

抗原抗体反应必须在合适的pH环境中进行。蛋白质具有两性电离性质，因此每种蛋白质都有固定的等电点。抗原抗体反应一般在pH为6～8进行。

PH过高或过低都将影响抗原与抗体的理化性质，例如pH达到或接近抗原的等电点时，即使无相应抗体存在，也会引起颗粒性抗原非特异性的凝集，造成假阳性反应。;温度：

在一定范围内，温度升高可加速分子运动，抗原与抗体碰撞机会增多，使反应加速。

常用的抗原抗体反应温度为37℃。每种试验都有其独特的最适反应温度，例如冷凝集素在4℃左右与红细胞结合最好，20℃以上反而解离。

其它：适当振荡也可促进抗原抗体分子的接触，加速反应。;;应用;2、利用已知抗体检测未知抗原;颗粒性抗原（细菌、细胞等）与相应的抗体在电解质存在的条件下结合，若两者比例适当，在一定的温度下经过一定的时间，出现肉眼可见的凝集物的现象。

⑴直接凝集

玻片凝集、试管凝集

⑵间接凝集;⑴直接凝集(directagglutination);细菌鉴定;血型鉴定;用已知的抗A或抗B抗体与受检者红细胞混合，抗A和或抗B抗体与红细胞表面上的相应抗原结合而引起红细胞凝集，根据其凝集状况判定受试者的血型。;抗A抗B;试管法：半定量试验，常用于抗体效价的测定，诊断伤寒或副伤寒的肥达氏反应(Widaltest)、诊断布氏菌病的瑞特氏反应(Wrighttest)。;;稀释度:1:201:401:801:1601:3201:640control;⑵间接凝集（indirectagglutination）;红细胞（O型人红细胞，羊红细胞及兔红细胞）→间接血球凝集

聚苯乙烯乳胶颗粒→间接乳胶凝集：抗O试验，coombstest

活性碳→间接碳粒凝集;⑶间接凝集抑制反应——妊娠试验;2.沉淀反应（precipitation）;分类;（1）环状沉淀反应(Ringprecipitationtest);;在抗体浓度不变的情况下随着抗原浓度不断上升免疫沉淀反应变化如图;简便、敏感度较低;（3）免疫比浊法（immunonephelometry）;按光路;主要应用：可取代单向扩散测定血清中Ig含量。;透射比浊法和散射比浊法光路;;反应要求;缺陷;散射比浊法（nephelometry);免疫比浊分析技术是传统免疫沉淀技术与比浊分析技术的结合

免疫比浊分析技术主要有透射免疫比浊分析和散射免疫比浊分析两种

速率测定和胶乳粒子增敏是免疫比浊分析的发展方向