免疫学检测技术PPT课件.ppt

竞争法测抗原第六十二页，课件共有104页第六十二页，课件共有104页操作步骤：（1）将特异抗体与固相载体连接，形成固相抗体洗涤。（2）待测管中加受检标本和一定量酶标抗原的混合溶液，使之与固相抗体反应，孵育洗涤。（3）加底物显色：参考管中由于结合的酶标抗原最多，故颜色最深。待测管颜色越淡，表示标本中抗原含量越多。参考管颜色深度与待测管颜色深度之差，代表受检标本抗原的量。第六十三页，课件共有104页第六十三页，课件共有104页竞争法测抗体当抗原材料中的干扰物质不易除去，或不易得到足够的纯化抗原时，可用此法检测特异性抗体。标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。标本中抗体量越多，结合在固相上的酶标抗体愈少，因此阳性反应呈色浅于阴性反应。第六十四页，课件共有104页第六十四页，课件共有104页捕获包被法测抗体样品中针对某些抗原的特异性IgM常和特异性IgG同时存在，后者会干扰IgM抗体的测定。因此测定IgM抗本多用捕获法。先将所有样品IgM（包括特异性IgM和非特异性IgM）固定在固相上，在去除IgG后再测定特异性IgM。第六十五页，课件共有104页第六十五页，课件共有104页操作步骤：（1）将抗IgM抗体连接在固相载体上，形成固相抗IgM，洗涤。（2）加入稀释的待测标本：孵育后样品中的IgM抗体被、固相抗体捕获，洗涤。（3）加入特异性抗原试剂：其仅与固相上的特异性IgM结合，洗涤。（4）加入针对抗原的酶标抗体：使之与结合在固相上的抗原反应结合，洗涤。（5）加底物显色：如有颜色显示，则表示标本中存在、特异性IgM抗体，是为阳性反应。第六十六页，课件共有104页第六十六页，课件共有104页第六十七页，课件共有104页第六十七页，课件共有104页亲和素-生物素-ELISA法亲和素是一种糖蛋白，可由蛋清中提取。每个分子由4个亚基组成，可以和4个生物素分子亲密结合。生物素（biotin）又称维生素H，存在于蛋黄中。可与蛋白质、糖类和酶等多种类型的大小分子形成生物素化的产物。亲和素与生物素的结合，虽不属免疫反应，但特异性强，亲和力大，形成一种极为稳定的复合体。把亲和素和生物素与ELISA偶联起来，就可大大提高ELISA的敏感度。第六十八页，课件共有104页第六十八页，课件共有104页第六十九页，课件共有104页第六十九页，课件共有104页乙型肝炎血清学检验临床意义乙型病毒性肝炎是由乙肝病毒（HBV）引起的、以肝脏炎性病变为主，并可引起多器官损害的一种疾病。乙肝广泛流行于世界各国，主要侵犯儿童及青壮年，少数患者可转化为肝硬化或肝癌。传播途径：血液传播、性接触传播和母婴传播第七十页，课件共有104页第七十页，课件共有104页HBV的抗原有3种：表面抗原（HBsAg）、核心抗原（HBcAg）和e抗原（HBeAg）。表面抗原大量存在于感染者血液中，是HBV感染以及检测的主要标志。核心抗原是乙肝病毒核心颗粒的唯一结构蛋白。由于它存在于Dane颗粒核心结构表面，被表面抗原覆盖，故不易在血循环中检出。可刺激机体产生抗-HBc。e抗原为可溶性蛋白质，在病理上认为是HBV复制以具有强感染性的一个指标。抗-HBe的出现，是预后良好的征象。第七十一页，课件共有104页第七十一页，课件共有104页HBsAg抗-HBsHBeAg抗HBe抗-HBc临床意义－－－－－过去和现在均未感染HBV－－－－＋曾感染HBV，急性感染恢复期－－－＋＋过去和现在均已感染过HBV－＋－－－预防注射疫苗－＋－＋＋既往感染；急性HBV感染恢复期－＋－－＋既往感染；急性HBV感染已恢复＋－－－＋急性HBV感染；慢性HBsAg携带者第七十二页，课件共有104页第七十二页，课件共有104页HBsAg抗-HBsHBeAg抗HBe抗-HBc临床意义＋－－＋＋急性HBV感染趋向恢复；慢性HBsAg?携带者，传染性弱；长期持续易癌变＋－＋－＋急性或慢性乙肝，传染性极强＋－－－－急性HBV感染早期，HBsAg携带者＋－＋－－急性HBV感染早期，传染性强－－＋＋＋急性感染中期＋－＋＋