《生物技术制药》第二章基因工程制药4.pptx

BiotechnologicalPharmaceutics基因工程制药基因工程制药GeneEngineeringforPharmaceutics（四）

BiotechnologicalPharmaceutics基因工程制药质粒的不稳定性分裂不稳定：指工程菌分裂时出现一定比例不含质粒子代菌的现象。结构不稳定：指外源基因从质粒上丢失或碱基重排、缺失所致工程菌性能的改变。

BiotechnologicalPharmaceutics基因工程制药提高质粒稳定性的方法选择合适的宿主菌选择合适的载体选择压力分阶段控制培养控制培养条件固定化

BiotechnologicalPharmaceutics基因工程制药第九节基因工程药物的分离纯化基因工程药物或生物技术产品特点:(1)目的产物在初始原料中的含量较低;(2)含目的产物的初始物料组成复杂,除了目的产物外,还有大量的细胞、代谢、残留培养基、无机盐等，特别是产物类似物对目的产物的分离纯化影响很大；

BiotechnologicalPharmaceutics基因工程制药(3)目的产物的稳定性差，具有生物活性的物质对pH、温度、金属离子、有机溶剂、剪切力、表面张力等十分敏感，容易是其失活、变性；种类繁多，包括大、中、小分子、结构简单或复杂的有机化合物，以及结构复杂又性质各异的生物活性物质；应用面广，对其质量、纯度要求高，甚至要求无菌、无热源。

BiotechnologicalPharmaceutics基因工程制药一、建立分离纯化工艺的根据1、含目的产物的起始物料的特点利用基因工程菌进行发酵生产的产物，其上游过程中的各种因素均对分离纯化技术和工艺有直接影响。

BiotechnologicalPharmaceutics基因工程制药一、建立分离纯化工艺的根据（1）菌种类型及其代谢特性：（2）原材料和培养基的来源及其质量；（3）生产工艺和条件：（4）初始物料的物理、化学和生物学特性：

BiotechnologicalPharmaceutics基因工程制药一、建立分离纯化工艺的根据2、物料中杂质的种类和性质物料中杂质的含量、性质、结构、相对分子质量、电荷性质及数量、生物学特性、稳定性、溶解度、分配系数、挥发性、吸附性能等。

BiotechnologicalPharmaceutics基因工程制药一、建立分离纯化工艺的根据3、目的产物特性产物的化学、物理和生物学特性，包括化学组成、相对分子质量、等电点、电荷分布及密度、溶解度、稳定性、疏水性、扩散性、扩散系数、分配系数、吸附性能、生物学活性、亲和性、配基种类、表面活性等。

BiotechnologicalPharmaceutics基因工程制药一、建立分离纯化工艺的根据4、产品质量的要求产品质量标准和用途对产品纯度、生物活性、比活的要求。包括允许的杂质种类和最大允许含量，特殊杂质的种类和最大允许量，以及杂质对使用的影响，产品剂型、贮存稳定性等。

BiotechnologicalPharmaceutics基因工程制药二、分离纯化的基本过程由于基因工程药物是从转化细胞、而不是从正常细胞生产的，所以对产品的纯度要求也要高于传统产品。基因工程药物的分离纯化一般不应超过4-5个步骤，包括细胞破碎、固液分离、浓缩与初步纯化、高度纯化直至得到纯品以及成品加工。

BiotechnologicalPharmaceutics基因工程制药基因工程药物分离纯化的一般流程发酵液细胞分离胞内产物胞外产物细胞破碎固液分离包含体细胞碎片分离变性复性浓缩初步分离高度纯化制剂产品

BiotechnologicalPharmaceutics基因工程制药三、分离纯化的技术1）技术条件要温和，能保持目的产物的生物活性；2）选择性要好，能从复杂的混合物中有效的地将目的产物分离出来，达到较高纯化倍数；3）收率要高；4）两个技术之间要能直接衔接，不需要对物料加以处理或调整，这样可减少工艺步骤；5）整个分离纯化过程要快，能够满足高生产率的要求。

BiotechnologicalPharmaceutics基因工程制药3-1、细胞破碎与固液分离（1）细胞收集：离心和膜过滤（2）细胞破碎：机械法---高压匀浆、超声波、高速珠磨、高压挤压等。非机械法----酶溶、化学渗透、热处理、渗透压冲击法。（3）固液分离：分离细胞碎片是