DB43T 2772-2023 羊踯躅组培育苗技术规程　　.docxVIP

ICS65.020.40CCSB61

43

湖南省地方标准

DB43/T2772—2023

羊踯躅组培育苗技术规程

CodeofpracticeforpropogationviatissuecultureofRhododendronmolle

2023-09-27发布2023-12-27实施

湖南省市场监督管理局发布

I

DB43/T2772—2023

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4缩略语 1

5无菌苗培养 1

6处植体处理 2

7组织培养 2

8炼苗 2

9移栽育苗 3

10档案管理 3

II

DB43/T2772—2023

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由湖南省林业局提出。

本文件由湖南省林业标准化技术委员会归口。

本文件起草单位：湖南省植物园、常德市鼎城区林业局。

本文件主要起草人：吴林世、廖菊阳、刘艳、李巧云、谢嘉浇、李曼、宋胤、王玲、易心钰、陈婵、张娟、刘馨蕴、王亚如。

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DB43/T2772—2023

羊踯躅组培育苗技术规程

1范围

本文件规定了羊踯躅（RhododendronmolleG.Don）组培育苗的无菌苗培养、外植体处理、组织培养、炼苗、移栽育苗和档案管理等技术要求。

本文件适用于羊踯躅组培育苗。

2规范性引用文件

本文件没有规范性引用文件。

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

AC：活性炭粉（Charcoalactivatedpowder）IBA：吲哚丁酸（Indole-3-Butytrieacid）

NAA：α-萘乙酸(α-Naphthylaceticacid）TDZ：噻苯隆（Thidiazuron）

WPM：木本植物培养基（WoodyPlantMadium）ZT：玉米素（Zeatin）

5无菌苗培养

5.1种子收集

9月～10月，当蒴果由青绿色转变为淡黄色时采集。置于干燥通风处阴干脱粒，置于4℃冰箱冷藏备用。

5.2消毒灭菌

种子使用75%的酒精浸泡10s，无菌水漂洗1次，用5%次氯酸钠进消毒5min，2%氯化钙溶液清洗2次，无菌水清洗5次，备用。

5.3诱导发芽

种子发芽培养基WPM+TDZ1.0mg/L+NAA0.5mg/L。培养基分装完成后应在10h内进行湿热灭菌，灭菌调节为121℃,20min。灭菌后培养基放再储存间，储存时间不超过7d。

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消毒后每瓶接种10粒种子。培养基附加6.0g/L琼脂和30.0g/L蔗糖，用0.1mol/L的氢氧化钠或氯化氢调节pH值至5.4～5.6，培养温度为（25±1）℃,光照强度为1500lx～2000lx，每日光照时数12h。

6处植体处理

6.1处植体制作

选取生长健壮的羊踯躅无菌苗嫩叶，除去叶梢和叶柄，并在叶片中部垂直于叶脉横切一刀，剪成边长大约为0.5cm的正方形，备用。

6.2接种

在超净工作台上，将叶片正面朝上平放于培养基上，每瓶接种3个～4个外植体，酒精灯快速灼烧瓶口一圈后密封，注明标签。

7组织培养

7.1培养条件

培养基附加6.0g/L琼脂和30.0g/L蔗糖，调节pH值至5.4～5.6，培养温度为（25±1）℃,光照强度为1500lx～2000lx，每日光照时数12h。

7.2初代培养

初代培养基为WPM+TDZ1.0mg/L+NAA1.0mg/L。叶片在培养基上长出大量淡黄色的椭圆形颗粒，诱导形成愈伤组织。愈伤组织培育至叶片周边生长出蓬松状、黄绿色的颗粒为宜。

7.3分化培养

分化培养基为WPM+ZT1.0mg/L+NAA0.5mg/L。将愈伤组织切割成小块放置培养基中，诱导分化长出健壮的不定芽。不定芽颜色嫩绿，高1.5cm～2.0cm时进行下一步培养。

7.4增殖培养

增殖培养基为WPM+ZT1.5mg/L+NAA1.0mg/L。丛生芽切割为0.5cm～1.0cm的小块，转接至增殖培养基上，得到大量的丛生芽。丛生芽高2.5