狂犬病疫苗的研制 .pdfVIP

生物制药工艺与设备

狂犬病及其疫苗的研制过程

摘要：目的应用Vero细胞研制人用精制狂犬病疫苗。方法应用Vero细胞经转瓶或生物反应

器培养制备人用精制狂犬病疫苗。结果各项质控指标均符合WHO和中国生物制品规程标准,经

Ⅰ期临床观察疫苗是安全的。结论用Vero细胞生产的狂犬病疫苗产量大,效价高,不良反应

少,且能进行工业化生产。

关键词：狂犬病病毒疫苗Vero细胞

狂犬病是一种自然疫源性疾病,是由狂犬病毒引起的所有温血动物都易感的人兽共患

性疾病,一旦发病,100%死亡。唯一有效的预防手段就是及时注射狂犬疫苗。我国每年需要

600万人份左右的狂犬病疫苗。但是我国现行的原代地鼠肾细胞培养狂犬病疫苗。生产工艺

落后,生产效率低,特别是疫苗的稳定性差,免疫失败的例子很多,尽管1994年开始浓

缩3～5倍,一定程度上解决了疫苗稳定性差的问题,但浓缩后的副反应比较严重。所以研

制和生产国际上已得到广泛承认和推广的Vero细胞疫苗已势在必行。

狂犬病即疯狗症，又名恐水症，是一种侵害中枢神经系统的急性病毒性传染病，所有温

血动物包括人类，都可能被感染。它多由染病的动物咬人而得。一般认为口边出白色泡沫的

疯狗咬到传染，其实猫，白鼬，浣熊，臭鼬，狐狸或蝙蝠也可能患病并传染。患病的动物经

常变得非常野蛮，在唾液里的病毒从咬破的伤口进入下一个病人。狂犬病从一个人传到另外

一个人极为少见，患狂犬病的人类患者多数会发病身亡。

狂犬病病毒对神经系统有强大的亲和力，病毒进入人体后，主要沿神经系统传播和扩散，

病毒侵入人体后先在伤口的骨骼肌和神经中繁殖，这称为局部少量繁殖期，此期可长可短，

最短为72小时，最长可达数周、数月甚至更长。病毒在局部少量繁殖后即侵入神经末梢，

沿周围神经以每小时3mm的速度向中枢神经推进，到达脊髓后即大量繁殖，24小时后遍布

整个神经系统。以后病毒又沿周围神经向末梢传播，最后到达许多组织器官，如唾液腺、味

蕾、角膜、肌肉、皮肤等，由于头、面、颈、手等部位神经比较丰富，病毒易于繁殖，再加

上离中枢神经较近，故这些部位被咬伤后发病者较多，潜伏期也较短；伤势越严重，也越容

易发病。病毒在中枢神经中主要侵犯迷走神经核、舌咽神经核和舌下神经核等。这些神经核

主要支配吞咽肌和呼吸肌，受到狂犬病病毒侵犯后，就处于高度兴奋状态，当饮水时，听到

流水声，受到音响、吹风和亮光等刺激时，即可使吞咽肌和呼吸肌发生痉挛，引起吞咽和呼

吸困难。

导致狂犬病的病原体是弹状病毒科狂犬病病毒属的狂犬病病毒（RabiesVirus）。完整

的狂犬病病毒呈子弹形，长度大约为200纳米左右直径为70纳米左右。整个病毒由最外层

的脂质双分子层外膜、结构蛋白外壳和负载遗传信息的RNA分子构成。目前普遍认为狂犬

狂犬病说明及防治病病毒有四个不同的血清型。狂犬病病毒对不利环境的抵抗力非常

弱，在表面活性剂、消毒剂如甲醛、升汞、碘酒还有酸碱环境下会很快失去活性，并且对热

和紫外线极其敏感。

人用狂犬病疫苗既往种类较多，现今国内外多使用细胞培养疫苗。我国现在使用的有精

制VERO细胞狂犬病疫苗和精制地鼠肾细胞狂犬病疫苗，浓缩地鼠肾细胞狂犬病疫苗已禁用。

狂犬病疫苗人用精制VERO细胞狂犬病疫苗及精制地鼠肾细胞狂犬病疫苗均为轻度混浊白色

液体，久放形成可摇散的沉淀，含硫柳汞防腐剂。

1材料和方法

1.1细胞及其培养

I

生物制药工艺与设备

Vero细胞株:来源于中国药品生物制品检定所,并进行了细胞的外源因子检查、肿瘤

原性检查、染色体检查,证明该细胞无细菌、霉菌、支原体及病毒污染,无致肿瘤性,细胞

染色体分布在58～60之间,符合世界卫生组织狂犬病专家委员会制定的关于应用传代细

胞制备疫苗的规程要求。

1.2狂犬病病毒

狂犬病毒固定毒CTN-1珠，由中国药品生物制品检验所提供。毒种毒力≥7.5LD/ML,

50

小白鼠脑内法作中和试验，中和指数大于500，无菌试验及病