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雌激素对乳鼠心肌细胞脑钠肽表达的影响及机制
吴凌凌;陈艺莉;黄艺仪;周越;何建桂
【摘要】[目的]探讨雌激素对原代培养的心肌细胞内脑钠肽(BNP)的表达是否有影
响以及雌激素影响BNP表达的机制.[方法]视实验目的给予无血清饥饿状态下的心
肌细胞不同浓度的雌激素以及相应通路抑制剂处理,以RT-PCR测定细胞内BNP的
mRNA水平,以Western-Blotting测定细胞内BNP的蛋白表达量以及相关通路的
磷酸化水平,以免疫荧光技术观察雌激素刺激下心肌BNP的亚细胞定位.[结果]雌激
素刺激能够显著上调心肌细胞内的BNPmRNA以及蛋白水平(P<0.05),雌激素受
体抑制剂ICI182780能够抑制该效应(P<0.05).雌激素处理能够上调心肌Akt以
及p38蛋白磷酸化水平(P<0.05),但不能上调Erk1/2蛋白磷酸化水平.预处理
PI3K/Akt通路抑制剂LY294002或p38MAPK通路抑制剂SB203580均能够降
低雌激素诱导的心肌细胞BNP表达(P<0.05).[结论]雌激素能够特异性地通过其受
体影响心肌细胞BNP的表达,并且PI3K/Akt通路以及p38MAPK通路均参与了
雌激素诱导的心肌细胞BNP表达过程.
【期刊名称】《中山大学学报(医学科学版)》
【年(卷),期】2014(035)004
【总页数】6页(P488-493)
【关键词】雌激素;BNP;Akt;p38;心肌细胞
【作者】吴凌凌;陈艺莉;黄艺仪;周越;何建桂
【作者单位】中山大学附属第一医院心内科,广东广州510080;中山大学附属第一
医院心内科,广东广州510080;中山大学附属第一医院急诊科,广东广州510080;中
山大学附属第一医院心内科,广东广州510080;中山大学附属第一医院心内科,广东
广州510080
【正文语种】中文
【中图分类】Q2
脑钠肽(brainnatriureticpeptide,BNP)是一种重要的心脏内分泌肽,最初由
Sudoh等[1]在1988年从猪脑分离出来而定名,属于钠尿肽家族的一员,由于
其利尿、利钠、舒张血管、抑制醛固酮和肾素合成、拮抗交感神经过度反应的效应,
在调节血压、血容量和盐平衡方面起重要作用[2]。BNP在心肌的表达既往一
般认为主要受到室壁张力影响,近来发现BNP还受到缺氧、炎症因子、神经内分
泌等多种因素影响[3]。许多信号通路如p38MAPK以及Erk1/2都在各种因
子调控心肌细胞BNP表达中扮演重要角色[4]。临床研究观察表明,绝经前女
性循环中的BNP水平较同龄男性高1.7倍,绝经后这种差异减小[5]。而给
予雌激素替代治疗后BNP水平又再升高[6]。提示雌激素很可能是导致BNP
男女循环水平差异的重要原因。本研究旨在通过建立原代心肌细胞体外模型,给
予雌激素刺激心肌细胞,观察心肌细胞内的BNP的表达,并检测雌激素下游和
BNP上游的信号通路的激活情况,给予相应的通路抑制剂以明确雌激素是否能够
影响心肌细胞内BNP的表达以及雌激素调控心肌内BNP表达的具体机制。
1材料与方法
1.1实验动物
SPF级SpragueDawley(SD)大鼠购自中山大学实验动物中心,1~2天龄,
雌雄不限。许可证号:SCXK(粤)2004-2011。实验动物使用方案经过中山大
学附属第一医院医学伦理委员会审核通过[2012(297)]。
1.2主要试剂
活性炭/葡萄糖预处理的胎牛血清(Hyclone);无酚红DMEM-F12培养基
(Sigma);17-beta-雌二醇(Sigma);苯肾上腺素(Sigma)雌激素受体抑
制剂ICI182780(Sigma);p38MAPK通路抑制剂SB203580(sigma);
PI3K/Akt通路抑制剂LY294002(CellSignalingTechnology);RNA提取
试剂盒:Trizolreagent(
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