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雌激素对乳鼠心肌细胞脑钠肽表达的影响及机制

吴凌凌;陈艺莉;黄艺仪;周越;何建桂

【摘要】[目的]探讨雌激素对原代培养的心肌细胞内脑钠肽(BNP)的表达是否有影

响以及雌激素影响BNP表达的机制.[方法]视实验目的给予无血清饥饿状态下的心

肌细胞不同浓度的雌激素以及相应通路抑制剂处理,以RT-PCR测定细胞内BNP的

mRNA水平,以Western-Blotting测定细胞内BNP的蛋白表达量以及相关通路的

磷酸化水平,以免疫荧光技术观察雌激素刺激下心肌BNP的亚细胞定位.[结果]雌激

素刺激能够显著上调心肌细胞内的BNPmRNA以及蛋白水平(P<0.05),雌激素受

体抑制剂ICI182780能够抑制该效应(P<0.05).雌激素处理能够上调心肌Akt以

及p38蛋白磷酸化水平(P<0.05),但不能上调Erk1/2蛋白磷酸化水平.预处理

PI3K/Akt通路抑制剂LY294002或p38MAPK通路抑制剂SB203580均能够降

低雌激素诱导的心肌细胞BNP表达(P<0.05).[结论]雌激素能够特异性地通过其受

体影响心肌细胞BNP的表达,并且PI3K/Akt通路以及p38MAPK通路均参与了

雌激素诱导的心肌细胞BNP表达过程.

【期刊名称】《中山大学学报(医学科学版)》

【年(卷),期】2014(035)004

【总页数】6页(P488-493)

【关键词】雌激素;BNP;Akt;p38;心肌细胞

【作者】吴凌凌;陈艺莉;黄艺仪;周越;何建桂

【作者单位】中山大学附属第一医院心内科,广东广州510080;中山大学附属第一

医院心内科,广东广州510080;中山大学附属第一医院急诊科,广东广州510080;中

山大学附属第一医院心内科,广东广州510080;中山大学附属第一医院心内科,广东

广州510080

【正文语种】中文

【中图分类】Q2

脑钠肽(brainnatriureticpeptide,BNP)是一种重要的心脏内分泌肽,最初由

Sudoh等[1]在1988年从猪脑分离出来而定名,属于钠尿肽家族的一员,由于

其利尿、利钠、舒张血管、抑制醛固酮和肾素合成、拮抗交感神经过度反应的效应,

在调节血压、血容量和盐平衡方面起重要作用[2]。BNP在心肌的表达既往一

般认为主要受到室壁张力影响,近来发现BNP还受到缺氧、炎症因子、神经内分

泌等多种因素影响[3]。许多信号通路如p38MAPK以及Erk1/2都在各种因

子调控心肌细胞BNP表达中扮演重要角色[4]。临床研究观察表明,绝经前女

性循环中的BNP水平较同龄男性高1.7倍,绝经后这种差异减小[5]。而给

予雌激素替代治疗后BNP水平又再升高[6]。提示雌激素很可能是导致BNP

男女循环水平差异的重要原因。本研究旨在通过建立原代心肌细胞体外模型,给

予雌激素刺激心肌细胞,观察心肌细胞内的BNP的表达,并检测雌激素下游和

BNP上游的信号通路的激活情况,给予相应的通路抑制剂以明确雌激素是否能够

影响心肌细胞内BNP的表达以及雌激素调控心肌内BNP表达的具体机制。

1材料与方法

1.1实验动物

SPF级SpragueDawley(SD)大鼠购自中山大学实验动物中心,1~2天龄,

雌雄不限。许可证号:SCXK(粤)2004-2011。实验动物使用方案经过中山大

学附属第一医院医学伦理委员会审核通过[2012(297)]。

1.2主要试剂

活性炭/葡萄糖预处理的胎牛血清(Hyclone);无酚红DMEM-F12培养基

(Sigma);17-beta-雌二醇(Sigma);苯肾上腺素(Sigma)雌激素受体抑

制剂ICI182780(Sigma);p38MAPK通路抑制剂SB203580(sigma);

PI3K/Akt通路抑制剂LY294002(CellSignalingTechnology);RNA提取

试剂盒:Trizolreagent(

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