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枸杞及其制品中2-O-β-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸
(AA-2βG)的测定高效液相色谱法
1范围
本标准规定了枸杞、枸杞制品和加工产物中的2-O-β-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸(AA-2βG)含量检测的高效液相色谱方法;
本标准适用于枸杞、枸杞制品和加工产物中2-O-β-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸(AA-2βG)含量的测定;
本方法取样量为10mg时,方法检出限为5mg/g。
2原理
样品经过超声提取抽滤浓缩至10ml,经阴离子交换柱分离纯化,收集组分浓缩,经高效液相色谱仪紫外检测器,外标法定量分析。
3试剂
除另有规定外,均要求试剂为分析纯试剂。实验室用水均为一级水,电导率25摄氏度时为
0.01ms/m。
3.1甲醇(色谱纯)
3.2乙醇(分析纯)
3.3磷酸(优级纯)
3.4四丁基溴化铵(分析纯)
3.52-O-β-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸对照品:纯度≥99%。
3.62-O-β-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸对照品贮备溶液:精密称取AA-2βG10.0mg,超纯水溶解定容于10ml容量瓶中,制成1mg/ml的贮备液。标准对照品溶液由此稀释得到。
4仪器和设备
4.1高效液相色谱仪,二极管阵列或紫外检测器;
4.2超声波清洗机;
4.3旋转蒸发仪。
4.4分析天平。5分析步骤
5.1标准曲线制备:分别精密量取lmg/ml的AA-2βG贮备液lml、2ml于50ml容量瓶中,超纯水定容,分别制成0.02mg/ml、0.04mg/ml的AA-2βG对照品溶液。吸取AA-2βG对照品溶液、AA-2βG贮备液各5μl和AA-2βG贮备液10μl、15μl进样,按5.3色谱条件进行色谱分析。以质量浓度为横坐标,峰面积为纵坐标绘制标准曲线。
5.2试样制备:取粉碎好的试样10.00克,加80ml33%乙醇,30℃超声提取1h,静置浸渍
48h,抽滤浓缩至10ml,分离纯化,收集分离组分,浓缩至10ml容量瓶,过0.45μm水系微孔滤膜。
5.3液相色谱参考分析条件
5.3.1色谱柱:C18色谱柱(250×4.6mm,5μm);检测波长254nm。
5.3.2流动相:20%甲醇:20mM磷酸+5mM四丁基溴化铵=20:80;
5.3.3流速:0.5ml/min;
5.3.4柱温35℃;
5.3.5进样量5μl;6结果计算
按式(1)计算试样中AA-2βG的含量。
X=V根C根1000(1)
m
X-试样中AA-2βG的含量,单位为mg/kg;
V-定容体积(ml)
m-样品称样量(g)
C-曲线查得二氢槲皮素的含量(mg/ml)
计算结果保留两位有效数字。
7精密度
重复性条件下测得两次独立的结果,其相对偏差不得超过10%;
8色谱图见附录A
附录A
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