枸杞及其制品中AA-2BG含量的测定.docxVIP

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枸杞及其制品中2-O-β-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸

(AA-2βG)的测定高效液相色谱法

1范围

本标准规定了枸杞、枸杞制品和加工产物中的2-O-β-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸(AA-2βG)含量检测的高效液相色谱方法;

本标准适用于枸杞、枸杞制品和加工产物中2-O-β-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸(AA-2βG)含量的测定;

本方法取样量为10mg时,方法检出限为5mg/g。

2原理

样品经过超声提取抽滤浓缩至10ml,经阴离子交换柱分离纯化,收集组分浓缩,经高效液相色谱仪紫外检测器,外标法定量分析。

3试剂

除另有规定外,均要求试剂为分析纯试剂。实验室用水均为一级水,电导率25摄氏度时为

0.01ms/m。

3.1甲醇(色谱纯)

3.2乙醇(分析纯)

3.3磷酸(优级纯)

3.4四丁基溴化铵(分析纯)

3.52-O-β-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸对照品:纯度≥99%。

3.62-O-β-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸对照品贮备溶液:精密称取AA-2βG10.0mg,超纯水溶解定容于10ml容量瓶中,制成1mg/ml的贮备液。标准对照品溶液由此稀释得到。

4仪器和设备

4.1高效液相色谱仪,二极管阵列或紫外检测器;

4.2超声波清洗机;

4.3旋转蒸发仪。

4.4分析天平。5分析步骤

5.1标准曲线制备:分别精密量取lmg/ml的AA-2βG贮备液lml、2ml于50ml容量瓶中,超纯水定容,分别制成0.02mg/ml、0.04mg/ml的AA-2βG对照品溶液。吸取AA-2βG对照品溶液、AA-2βG贮备液各5μl和AA-2βG贮备液10μl、15μl进样,按5.3色谱条件进行色谱分析。以质量浓度为横坐标,峰面积为纵坐标绘制标准曲线。

5.2试样制备:取粉碎好的试样10.00克,加80ml33%乙醇,30℃超声提取1h,静置浸渍

48h,抽滤浓缩至10ml,分离纯化,收集分离组分,浓缩至10ml容量瓶,过0.45μm水系微孔滤膜。

5.3液相色谱参考分析条件

5.3.1色谱柱:C18色谱柱(250×4.6mm,5μm);检测波长254nm。

5.3.2流动相:20%甲醇:20mM磷酸+5mM四丁基溴化铵=20:80;

5.3.3流速:0.5ml/min;

5.3.4柱温35℃;

5.3.5进样量5μl;6结果计算

按式(1)计算试样中AA-2βG的含量。

X=V根C根1000(1)

m

X-试样中AA-2βG的含量,单位为mg/kg;

V-定容体积(ml)

m-样品称样量(g)

C-曲线查得二氢槲皮素的含量(mg/ml)

计算结果保留两位有效数字。

7精密度

重复性条件下测得两次独立的结果,其相对偏差不得超过10%;

8色谱图见附录A

附录A

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