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枸杞及其制品中二氢槲皮素的测定
高效液相色谱法
1范围
本标准规定了枸杞、枸杞制品和加工产物中的二氢槲皮素含量检测的高效液相色谱方法；本标准适用于枸杞、枸杞制品和加工产物中二氢槲皮素含量的测定；
本方法取样量为10mg时，方法检出限为5mg/g。
2原理
采用甲醇减压蒸馏提取试样中二氢槲皮素，以甲醇一水(50：50)为流动相，采用C18色谱柱(250×4.0mm,5μm)；流速1.0ml/min；柱温：30℃;检测波长320nm。外标法定量分析。
3试剂
除另有规定外，均要求试剂为分析纯试剂。实验室用水均为一级水，电导率25摄氏度时为
0.01ms/m。
3.1甲醇（色谱纯）
3.2乙醇（分析纯）
3.3层析用聚酰胺(80—100目)
3.4二氢槲皮素对照品：纯度≥99%。
3.5二氢槲皮素对照品溶液：精密称取二氢槲皮素对照品2.5mg,置50ml容量瓶中，加甲醇超声振荡溶解并稀释至刻度，摇匀得50μg/ml对照品溶液。
3.6二氢槲皮素标准系列溶液：分别精密吸取5，10，15，20，25μL二氢槲皮素对照品溶液进样作为标准系列溶液。
4仪器和设备
4.1高效液相色谱仪，二极管阵列或紫外检测器。
4.2超声波清洗机
4.3回流冷凝装置
4.4分析天平。5分析步骤
5.1试样制备：取粉碎好的试样200克，精密称定至1000ml具塞圆底烧瓶中加入70%乙醇，十倍量回流两次，2h/次，合并滤液过滤减压收干，加热蒸馏使水分散静置，过夜得棕黄色溶液及黑绿色沉淀过滤滤液减压，蒸干得浸膏，备用。取甲醇处理过的聚酰胺适量，按径高比1：3装入直径7.5cm长60cm的玻璃柱中。浸膏水溶解湿法上柱，用50%乙醇梯度洗脱收集馏分，减压蒸干得残渣。
5.2.供试品溶液的制备：称取上述残渣10mg,精密称定，加甲醇适量并转移至10ml容量瓶中，超声溶解，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。进样前用0.45μm微孔滤膜过滤。
5.3液相色谱参考分析条件
5.3.1色谱柱：C18色谱柱(250×4.0mm,5μm)；检测波长：320nm。
5.3.2流动相：甲醇+水=50+50（体积）；
5.3.3流速：1.0ml/min；
5.3.4柱温30℃;
5.3.5进样量10μl；6结果计算
按式（1）计算试样中二氢槲皮素的含量。
X=V根C（1）
m
X-试样中二氢槲皮素的含量，单位为mg/g；
V-定容体积（ml）
m-样品称样量（g）
C-曲线查得二氢槲皮素的含量（mg/ml）
计算结果保留两位有效数字。
7精密度
重复性条件下测得两次独立的结果，其相对偏差不得超过10%；
8色谱图见附录A
附录A
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