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氨溴索在大鼠肺缺血再灌注损伤中的抗炎作用

摘要】目的：探讨氨溴索在大鼠肺缺血再灌注损伤中的抗炎保护作用。方法：30只健康Sprague-Dawley雄性大鼠随机分为3组：对照组、损伤组、氨溴索组。肺组织湿重/干重比、谷胱甘肽过氧化物酶活性、超氧化物歧化酶活性的测定；ELISA法测定血清及肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素10（IL-10）含量；光镜下观察肺组织结构变化。结果：与对照组比较，损伤组肺组织湿重/干重比增加（P0.05）、谷胱甘肽过氧化物酶活性及超氧化物歧化酶活性均降低（P0.05），血浆及肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素10（IL-10）含量增高（P0.05）；肺组织出现病理组织学损伤。与损伤组比较，氨溴索组肺组织湿重/干重比降低（P0.05）、谷胱甘肽过氧化物酶活性及超氧化物歧化酶活性均增高（P0.05），血浆及肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素10（IL-10）含量降低（P0.05）。肺组织病理学损伤减轻。结论：氨溴索可通过抗氧化应激及抑制炎性细胞因子释放在肺缺血再灌注损伤中发挥抗炎保护作用。

【关键词】氨溴索?肺缺血/再灌注损伤?抗炎作用

【中图分类号】R965?????????【文献标识码】A?????????【文章编号】2095-1752（2013）10-0022-02

???????肺缺血再灌注损伤（Lungischemiareperfusioninjury，LIRI）是指遭受一定时间缺血的肺组织在恢复血供后，组织损伤加重的现象，进一步可引起急性肺损伤甚至发生急性呼吸窘迫综合症[1]。肺缺血再灌注损伤在临床上可发生于肺栓塞溶栓治疗后、心肺复苏成功术后、休克状态改善甚至肺移植术后等。积极探索肺缺血再灌注损伤的分子机制并提出新的有效防治措施，具有重要的医学价值和临床意义。

???????研究发现大剂量氨溴索具有化痰、抗炎、抗氧化及促进肺表面活性物质合成等作用[2]。本实验通过建立大鼠原位肺缺血再灌注损伤模型，使用氨溴索进行干预，研究药物在其中的抗炎保护作用。

???????1材料和方法

???????1.1实验动物和主要试剂健康清洁级雄性SD大鼠，体重250～300g，由徐州医学院实验动物中心提供；氨溴索购于德国勃林格殷格翰公司；GSH-Pxase试剂盒、SOD试剂盒以及TNFα、IL1β、IL-10ELISA试剂盒均由南京建成生化试剂公司提供。

???????1.2大鼠原位肺缺血再灌注损伤模型的建立及分组SD大鼠30只，按随机数字表法分为3组，每组10只。对照组：实验过程同损伤组，不夹闭肺门。损伤组：动物模型采用Eppinger等模型[3]，使用3%戊巴比妥钠50mg/kg体重腹腔注射麻醉动物，行气管切开及气管插管术，并接小动物呼吸机辅助呼吸，胸骨右缘第四肋间开胸，用动脉夹夹住右肺根部30min，作为缺血期；30min后放开动脉夹，使肺充盈120min，作为再灌注期，于再灌注后左房放血处死大鼠。氨溴索组：损伤发生前2h尾静脉注射氨溴索（50mg/kg），其余步骤同损伤组。?

???????1.3取材及制备标本损伤发生后2h颈动脉取血4ml后放血处死大鼠。立即开胸取出肺组织，取右上叶肺用于病理学检查；取右中叶肺称重；剩余右肺制成肺组织匀浆液：按每100mg肺组织加入0.9mlPBS（pH7.4），在冰浴下用组织匀浆器制成10%肺组织匀浆。左肺用4℃予生理盐水行肺泡灌洗，灌洗回收率85%。颈动脉血、肺组织匀浆液、肺泡灌洗液分别于4℃、5000r/min离心15min，取上清于-80℃冻存。

???????1.4检测指标与方法

???????1.4.1肺湿/干重（W/D）比测定取右中叶肺组织称重后置于烤箱中，70℃烘烤至恒重后称干重，计算肺W/D。

???????1.4.2肺组织GSH-Pxase活性和SOD含量测定肺组织匀浆液上清分别按照试剂盒说明进行，通过紫外比色法测定GSH-Pxase酶活性、黄嘌呤氧化酶法测定SOD含量。

???????1.4.3ELISA法测定血清及肺泡灌洗液中TNFα、IL1β、IL-10颈动脉血、新鲜肺泡灌洗液标本离心5000r/min15min，取上清，后操作步骤依据ELISA试剂盒进行。

???????1.4.4病理学观察取右上叶肺组织用10%甲醛固定，经石蜡包埋切片，苏木精-伊红染色后，光镜下观察病理学变化。

???????1.5统计学处理应用SPSS13.0软件包进行处理，计量资料以均数±标准差（x-±s）表示，采用单因素方差分析（on