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学必求其心得，业必贵于专精
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PCR仪是一种能在短时间内复制出大量DNA拷贝的仪器.其原理是什么？
1。理解PCR的原理，并与细胞内的DNA复制进行比较.
2．了解PCR技术操作过程及注意事项。
3．能用PCR仪扩增DNA，并估算DNA含量。
4．了解PCR的应用。
一、PCR原理
1．细胞内DNA复制的条件
参与的组分
在DNA复制中的作用
解旋酶
打开DNA双链
DNA母链
提供DNA复制的模板
4种脱氧核苷酸
合成子链的原料
DNA聚合酶
催化合成DNA子链
引物
使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸
温故知新DNA分子能准确复制的原因有哪些？
提示:DNA双螺旋结构提供模板；碱基互补配对.
2．子链延伸方向
通常将DNA的羟基末端称为3′端，磷酸基团末端称为5′端。DNA的合成方向总是从子链的5′端向3′端延伸。
3．人工控制DNA复制的条件
在80~100℃的温度范围内，DNA的双链分开,称为变性.当温度缓慢降低后，DNA链又会重新结合成双链。PCR利用了DNA的热变性原理，通过控制温度来控制双链的解聚与结合。PCR过程的温度高,导致DNA聚合酶失活，后来耐高温的DNA聚合酶的发现和应用,大大增加了PCR的效率.
自主思考DNA胞内复制与人工复制解旋的原理相同吗？
提示：不相同。胞内复制需要解旋酶，人工复制是加热解旋。
4．PCR反应的条件
PCR反应需要在一定的缓冲溶液中才能进行，需提供：DNA模板，分别与两条模板链结合的引物，四种脱氧核苷酸，耐热的DNA聚合酶，同时通过控制温度使DNA复制在体外反复进行。
二、PCR的反应过程
PCR一般要经历三十多次循环，每次循环可以分为变性、复性和延伸三步。从第二轮循环开始，上一次循环的产物也作为模板参与反应，并且由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链会与引物Ⅱ结合，进行DNA的延伸，这样,DNA聚合酶只能特异地复制处于两个引物之间的DNA序列,使这段固定长度的序列呈指数扩增。
三、实验操作
在实验室中用微量移液器，按PCR反应体系的配方在微量离心管中依次加入各组分，再设计好PCR仪的循环程序即可。
四、操作提示
为避免外源DNA等因素的污染,PCR实验中使用的微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌。PCR所用的缓冲液和酶应分装成小份，并在－20_℃储存。在向微量离心管中添加各反应成分时，移液器上的枪头必须更换。
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