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不同的培养方法对鼠胚体外发育的影响

刘继龙

【摘要】目的比较鼠胚在不同的培养体系中的体外发育情况,探讨培养液的体积对

体外培养的影响.方法把收集的小鼠2-细胞胚胎分成两组,A组于20μl培养液的微

滴中培养,B组与50μl培养液的微滴中培养,观察胚胎发育情况.结果96h后A、B

组的囊胚形成率分别为83.64%和81.63%,差异无统计学意义(P＞0.05).结论适当

体积的培养滴可促进胚胎的体外发育.

【期刊名称】《中国现代药物应用》

【年(卷),期】2011(005)002

【总页数】2页(P30-31)

【关键词】小鼠;胚胎;囊胚;体外培养

【作者】刘继龙

【作者单位】535000,钦州市妇幼保健院

【正文语种】中文

小鼠卵子体外受精技术是研究受精生理的重要手段，而研究小鼠胚胎体外发育是研

究哺乳动物胚胎发育的常规方法之一。为提高体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的成功

率，许多学者对维持受精卵适宜稳定的环境进行了探索［1，2］。选择适宜的培

养条件，是获得较高成功率的前提。本文就微滴的体积大小对2-细胞鼠胚体外发

育的影响进行了研究。旨在探讨不同的培养方法对胚胎体外发育潜能的影响，并为

人胚胎体外培养提供实验依据。

1.1一般资料昆明种小白鼠，购自广西医科大学实验动物中心，体重为25～35g，

按照SPF级实验动物饲养标准条件饲养。

1.2方法

1.2.1鼠胚采集选择4～6周龄雌鼠，于腹腔注射人绝经期尿促性腺激素(hMG)10

IU/只。46～48h后注射人绒毛膜促性腺激素(hCG)10IU/只。于注射hCG当晚

合笼过夜。第二天将阴栓阳性者挑选出来。注射hCG后42～46h用颈椎脱臼法

处死阴栓阳性雌鼠，取出输卵管。在体视镜下划破输卵管壶腹部，收集其中的2-

细胞期胚胎，并用含10%SPS的HTF冲洗3遍，再在培养液中冲洗1遍，选取优

质胚胎继续培养。

1.2.2体外培养本实验采用微滴法培养。于培养前一天按不同的方案做好微滴，并

覆盖矿物油，放入37℃，5%CO2，饱和湿度的二氧化碳培养箱中过夜平衡，将收

集的优质胚胎随机分成两组，A组于20μl培养液的微滴中培养，B组与50μl培

养液的微滴中培养。胚胎在37℃、5%CO2和饱和湿度的二氧化碳培养箱中持续

培养96h，每隔24h观察鼠胚发育的情况并记录。

1.3统计学方法采用SPSS10.0分析软件对所得数据进行显著性检验，计数资料

采用χ2检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

采用体内受精的方法获取2-细胞胚胎，在相同的培养条件下，A组分裂为4-细胞

胚胎的分裂率为89.09%，B组分裂为4-细胞胚胎的分裂率为92.86%，两者比较

差异无统计学意义(P＞0.05);A组的囊胚形成率为83.64%，B组的囊胚形成率为

81.63%，两者比较差异无统计学意义(P＞0.05)，但A组的囊胚形成率比B的稍

高(见表1)。

随着人类辅助生殖技术的不断发展，体外受精-胚胎移植技术现已成为治疗不育不

孕的主要手段之一。人类辅助生殖技术包括卵母细胞的体外受精、胚胎的早期体外

培养及胚胎移植等过程，这一系列过程要求有一个稳定的模拟母体内发育的体外培

养环境及娴熟的技巧。在体外培养过程中，所有与卵子、精子、胚胎接触的耗材和

试剂及环境，均有可能存在危害胚胎的因素［1］。活性氧是造成卵母细胞质量下

降和胚胎发育不良的重要因素之一。胚胎培养液中的活性氧的来源可能来自胚胎的

周围环境。它会引起早期胚胎发育停滞和延迟［3］。另外，由于开启培养箱引起

培养箱内外气体交换，室内空气消毒后残留的臭氧也是培养液活性氧升高的主要原

因之一。

本研究结果表明在体积为20μl与50μl的微滴中培养，2-细胞鼠胚的囊胚形成率

差异无统计学意义(83.64%vs81.63%，P＞0.05)。但在20μl的微滴中培养的2-

细胞鼠胚发育到囊胚阶段的胚胎数比在50μl的多，这可能是由于在整个体外发育

过程中胚胎在20μl微滴中受到外界的影响较小而造成。培养基可以吸收部分污染

物，如果微滴的体积过大，其与外界环境的接触面就越大，则溶解于培养基中的有

害物质就越多，胚胎受到的侵害面积就越大，从而影响胚胎的发育。而较小体积的

液滴由于与外界的接触面小，降低了氧化损伤的风险