版微生物限度检查法课件.ppt

05版微生物限度检查法2.检查法供试品的控制菌应按已验证的方法进行控制菌检查，增菌培养基的实际用量同“方法的验证”。阳性对照试验供试品进行控制菌检查时，应做阳性对照试验。阳性对照试验的加菌量为10～100cfu，方法同供试品的控制菌检查。阳性对照试验应检出相应的控制菌。阴性对照试验取稀释剂10ml加入100ml（或200ml）相应控制菌检查用的增菌培养基中，培养，应无菌生长。05版微生物限度检查法控制菌检查的步骤：取供试液接种增菌培养基，增菌、分离培养，革兰染色、生化试验等基本未变动，仅一些控制菌保留了前几项主要生化鉴别试验，删去了一些生化鉴别方法，这样的删节、简写，主要是节省篇幅。并不是删去，可以不做。如有可疑菌落，应进行分离、纯化、革兰染色镜检和适宜的生化试验，确认是否是要检查的控制菌。05版微生物限度检查法大肠埃希菌取供试液10ml直接或处理后接种至100ml的胆盐乳糖培养基中，培养18～24小时，必要时可延至48小时。取上述培养物0.2ml，接种至含5mlMUG培养基的试管内，培养，于5、24小时在366nm紫外光下观察，同时用未接种的MUG培养基作本底对照。若管内培养物呈现荧光，为MUG阳性；不呈现荧光，为MUG阴性。观察后，沿培养管的管壁加入数滴靛基质试液，液面呈玫瑰红色，为靛基质阳性；呈试剂本色，为靛基质阴性。本底对照应为MUG阴性和靛基质阴性。05版微生物限度检查法如MUG阳性、靛基质阳性，判供试品检出大肠埃希菌；如MUG阴性、靛基质阴性，判供试品未检出大肠埃希菌；如MUG阳性、靛基质阴性，或MUG阴性、靛基质阳性，则应取胆盐乳糖培养基的培养物划线接种于曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基的平板上，培养18～24小时。若平板上无菌落生长、或生长的菌落与表1所列的菌落形态特征不符，判供试品未检出大肠埃希菌。若平板上生长的菌落与表1所列的菌落形态特征相符或疑似，应进行分离、纯化、染色镜检和适宜的生化试验，确认是否为大肠埃希菌。（ChP、BP、USP）05版微生物限度检查法大肠菌群菌落形态特征菌落疑似者再进行确证试验菌落接种到胆盐乳糖发酵管，产酸产气报告检出大肠菌群，否则判未检出培养基菌落形态曙红亚甲蓝琼脂呈紫黑色、紫红色、红色或者粉红色，圆形，扁平或稍凸起，边缘整齐，表面光滑，湿润。麦康凯琼脂呈鲜桃红色或者粉红色，圆形，扁平或稍凸起，边缘整齐，表面光滑，湿润。05版微生物限度检查法大肠埃希菌在EMB、MAC上的特征05版微生物限度检查法生化试验05版微生物限度检查法沙门菌修订取供试品10g或10ml加至200ml的营养肉汤培养基中，用匀浆仪或其他适宜方法混匀，为试验组。取10ml稀释液加至200ml营养肉汤培养基中，为阴性对照组。培养18~24h，阴性对照应无菌生长。取上述培养物1ml，接种四硫磺酸钠亮绿培养基，培养后，划线分离胆盐硫乳琼脂（或SS）或MacC(或EMB)培养基平板，培养18～24h（必要时延长至40～48h）。若平板上无菌落生长，或生长的菌落不同于表中所列的特征，判供试品未检出沙门菌。05版微生物限度检查法若平板上生长的菌落特征与表中所列的菌落形态特征相符或疑似，用接种针挑选2～3个菌落分别于三糖铁琼脂培养基高层斜面上进行斜面和高层穿刺接种培养18～24小时，如斜面未见红色、底层未见黄色或斜面黄色、底层无黑色，判供试品未检出沙门菌否则，应取三糖铁琼脂培养基斜面的培养物进行适宜的生化试验和血清凝集试验，确认是否为沙门菌。（ChP、BP、USP）05版微生物限度检查法增菌培养预增菌取营养肉汤培养基3瓶，每瓶各100ml，2瓶加入1：10供试液各10ml，其中1瓶加入对照菌液0.1ml(含菌量为50～100个cfu/ml)作阳性对照，第3瓶加入稀释剂10ml作阴性对照，培养18～24h后观察。摇动阴性对照瓶后应清亮透明，无菌生长，否则试验无效增菌培养轻微摇动供试品增菌培养瓶及阳性对照培养瓶，分别吸取1ml各接种于1管四硫磺酸钠亮绿培养基中，培养18～24h。阳性对照管应呈现混浊05版微生物限度检查法分离培养轻微摇动供试品增菌培养瓶和阳性对照增菌培养瓶，以接种环分别沾取1～2环培养液接种于胆盐硫乳琼脂(DHL)或沙门菌志贺菌琼脂(SS)平板及曙红亚甲蓝(EMB)琼脂或麦康凯琼脂平板各1个，倒置培养24～48h。检查平板上有无疑似沙门菌菌落05版微生物限度检