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经肝内注射肿瘤细胞建立小鼠肝癌实验模型的效果观察

易永祥;赵伟;韩建波;宋艳;丁滢;周镇先

【摘要】目的探讨经肝内直接注射肝癌细胞建立小鼠肝癌原位模型的效果.方法

选取Ba1b/c小鼠来源的ML-3肝癌细胞经肝内直接注射接种至肝脏实质内,与经

脾注射肝癌细胞相比较,对其肝内成瘤情况进行观察.结果肿瘤细胞接种第6天起,

经脾脏注射组以及经肝脏注射组小鼠均不同程度出现体重减轻、腹水、黄疸以及腹

腔可触及包块.在经脾脏注射组,15只小鼠中仅有3只长出肝脏肿块,其余均腹腔种

植转移.在经肝脏直接注射组,15只小鼠中有10只长出肝癌,其中伴腹腔种植转移1

只.结论经肝脏直接注射肿瘤细胞较经脾脏注射法能更有效诱导建立肝癌原位模型.

【期刊名称】《肝胆胰外科杂志》

【年(卷),期】2013(025)005

【总页数】3页(P388-390)

【关键词】癌,肝细胞;原位模型;肝内注射;小鼠

【作者】易永祥;赵伟;韩建波;宋艳;丁滢;周镇先

【作者单位】东南大学附属第二医院普外科,江苏南京211102;东南大学附属第二

医院肝内科,江苏南京211102;东南大学附属第二医院普外科,江苏南京211102;东

南大学附属第二医院普外科,江苏南京211102;东南大学附属第二医院普外科,江苏

南京211102;东南大学附属第二医院生物治疗中心,江苏南京211102

【正文语种】中文

【中图分类】R735.7

原发性肝癌是世界上最致命的恶性肿瘤之一，由于这种疾病到目前为止还没有特别

有效的治疗方法，必须通过研究来提高对疾病的认识，并为治疗方案的制定提供更

好、更有价值的意见。为了这个目的，利用动物进行实验性研究势在必行，而动物

实验模型的建立就显得非常重要。人们建立了很多动物模型如肝硬化门脉高压模型、

大鼠胰腺炎模型等[1-2]。如何建立一个和人体类似的小鼠肝癌实验模型便于进行

各种治疗如手术、射频、化学治疗、免疫治疗等方面的研究，是迫切需要解决的问

题。文献报道的肝癌建模方法有多种，但大多数是用基因工程的方法来进行诱导

[3-4]。我们对经不同方式完成的几种小鼠肝癌模型比较后认为，直接的肝内注射

可以建立快捷、有效的小鼠肝癌模型，利于进一步的研究。

1材料和方法

1.1实验动物和细胞株

实验动物为Balb/c小鼠，雌性，7～8周龄，体重18～20g，清洁级，购自扬州

大学动物实验中心。随机分为经脾脏注射肿瘤细胞组和经肝脏注射肿瘤细胞组，每

组各15只。

实验细胞：ML-3细胞为Balb/c小鼠来源的肝癌细胞，由本实验室冻存及传代培

养。

1.2主要试剂

WilliamMediumE培养基以及胎牛血清购自Invitrogen公司。RPMI1640及

HBSS购自Lonza公司。

1.3肿瘤模型的建立

经ML-3细胞体外培养于含10%胎牛血清的WilliamMediumE培养基中，显微

镜下观察细胞生长状况良好，用HBSS缓冲液调配至含瘤细胞数为2×106个/mL，

抽取0.5mL用于接种。将小鼠置于无菌手术台，经异氟烷吸入麻醉后，摆好体位，

75%的酒精消毒后，沿左上腹纵向切开腹壁及腹膜。

经脾脏注射组：暴露脾脏，沿脾脏长轴插入针头，回抽确认不在血管后，注射0.5

mL肿瘤细胞，于10～15s内注射完毕。并在注射穿刺点加压按压1min，以防

出血以及肿瘤细胞渗出引起腹腔广泛种植转移。按压结束，距脾蒂约1～2mm处

截断脾脏游离端。关腹并常规应用抗生素预防感染。

经肝脏注射组：暴露肝脏，于肝脏表面进针约2～3mm，回抽确认不在血管后，

注射0.5mL肿瘤细胞，缓慢注射，注射完毕在注射穿刺点加压按压1min，以防

出血以及肿瘤细胞渗出引起腹腔广泛种植转移。关腹并常规应用抗生素预防感染。

1.4术后观察及治疗

分别对小鼠的体重、黄疸、腹水进行观察，7d后处死两组经脾脏注射肝癌细胞和

经肝脏注射肝癌细胞的各15只小鼠，观察肿瘤病灶的形成。

1.5统计学分析

统计软件为SPSS16.0，率的比较采用Pearson卡方检验，P＜0.05表示有统计

学意义。

2结果

2.1小鼠健康状况观察

肿瘤细胞接种第6天起，经脾脏注射组以及经肝脏注射组小鼠均不同程度出现体

重减轻、腹水、黄疸以及腹腔可触及包快，于