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亚硝酸钠急性经口毒性试验设计
实验目的
1、急性经口毒性试验是评估化学物毒性特性的第一步，通过短时间经口染毒可提供对健康危害的信息。试验结果可作为化学毒性分级和标签标识以及确定亚慢性毒性试验和其它毒理学试验剂量的依据。
2、此实验为设计性实验，通过此试验应学会化学物急性毒性评价试验的基本程序，并且掌握进行试验设计时应考虑的各种因素与试验条件。
3、熟悉实验动物的饲喂技术及基本要求，掌握实验动物灌胃的技能，学会LD50及其可信限的计算方法。
4、通过本试验获得受试化学物的半数致死剂量，并描述试验过程中实验动物的各种反应及可能的靶器官。
二、实验器材与试剂
实验试剂:苦味酸,酸性品红,水，动物饲料
实验动物与仪器：小白鼠、灌胃针、天平、饲养室、烧杯、容量瓶、吸量管、手术剪、托盘、镊子等
实验步骤
实验动物选择与管理：选择50只，2-3月龄，体重在18-22g的健康小鼠，小鼠重量相差在10%以内。
实验管理:实验前动物先适应饲料和环境4d。适应期间和试验期间雌雄分笼饲养，染毒前4小时小鼠必须空腹，染毒后继续禁食2-4h，染毒期间饮水不限。
实验条件：饲养室温度控制在22±3oC,相对湿度在30%-50%之间，无对流风，昼夜各半。
实验动物染色与分组：用黄色3%-5%苦味酸，0.5%酸性品红对动物进行染色标记，黄色和红色分别代表个位和十位。动物分为左、中、右三区，左上肢、左中部和左下肢分别表示1、2、3或者10、20、30，以此类推。50只动物分成随机分5组，分别为A、B、C、D、E每组10只，且雌雄各半。
剂量设计与剂量分组（见下表）：查阅文献得知小鼠LD50为200mg\kg.亚硝酸钠为白色至淡黄色粒状结晶或粉末，无味，易潮解，有毒，水溶液呈碱性，在水中溶解度为82g/100ml。相对密度（水=1g/cm3）：2.17g/cm3；熔点：271℃；沸点320℃（分解）。将亚硝酸钠溶于水中，动物按10ml\kg给药，得到的受试物浓度C=剂量/10（ml/kg）。
A
B
C
D
E
剂量对数值
i=0.2
lgLD50-2i
1.9
lgLD50-i
2.1
lgLD50
2.3
lgLD50+i
2.5
lgLD50+2i
2.7
剂量（mg\kg）
等比1.6
79.0
126．0
200．0
316.0
501.0
亚硝酸钠浓度（mg\10ml）
79
126
200
316
501
标准灌胃量(ml/kg)
10
10
10
10
10
6.灌胃处理：开始做实验时，开始染毒前3小时禁食，早上8点一次性对动物进行灌胃。以后每天对小鼠进行正常的饲料喂养。
灌胃量（mg\kg）=最初的体重（g）*小鼠灌胃容量（10ml\kg）*各组亚硝酸钠的浓度（mg\10ml）
体重-灌胃表
A
B
体重（g）
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
灌胃量（mg\kg）
C
D
体重（g）
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
灌胃量（mg\kg）
E
体重（g）
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
灌胃量（mg\kg）
7.试验周期与观察：实验持续一周时间，染毒后每天下午6点观察一次，记录各方面指标的变化。以A组动物体重变化为例子设计下表，其他组类推：
体重变化表
标
标
号
体
重
时
间
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
第一天
第二天
第三天
第四天
第五天
第六天
第七天
8.一般体征观察指标：示例A组
观察指标
1
2
3
4
5
体征
可能涉及
到的组织器官
体征
可能涉及
到的组织器官
体征
可能涉及
到的组织器官
体征
可能涉及
到的组织器官
体征
可能涉及
到的组织器官
鼻孔，呼吸状态，呼吸频率与深度，体表颜色变化
运动功能等行为改变
反射
眼检查
病理学检查，对病态严重者进行解剖，观察器官颜色等变化
排泄物
分泌物
体重的变化
其他指标
6
7
8
9
10
9.死亡动物情况
死亡动物记录表
A
B
C
D
E
动物死亡数量
动物死亡时间
尸体情况描述
五、实验结果与数据记录
组别
剂量/(mg/kg)
剂量对数(x)
动物数/只（n）
死亡数（r）
死亡率（p）
A
79
1.9
10
B
126
2.1
10
C
200
2.3
10
D
316
2.5
10
E
501
2.7
10
LgLD50=Xk-d/2(pi+p(i+1))
95%可信限(CI)=lgˉ1(lgld50±1.96*Slgld50)
六、实验结论
确定受试物毒性的分级，可能作用的靶器官，并描述出靶器官的变化
七、注意事项
灌胃针要插正确，防止戳破食道，对小鼠造成伤害
喂养小鼠时，注意每天清洁小鼠的排泄物，保
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