病毒学病毒的检验.ppt

例如从病犬大脑海马会发现胞浆中嗜酸性包涵体(内基小体),即可确诊为狂犬病;在麻疹病毒感染细胞的核内及胞浆内可找到一个或多个鲜红色的圆形、椭圆形或不规则形态的包涵体,被称为麻疹病毒包涵体。第96页,共105页，星期六，2024年，5月2、电镜(electronmicroscopy,EM)检查法电子显微镜技术可直接观察病毒的大小、形态、结构以及病毒在细胞内增殖的动态过程。制作电镜标本的方法主要有超薄切片(厚度为100nm左右)、磷钨酸负染法。超薄切片法也称正染法,将细胞固定、脱水、包埋、切片、染色,然后观察病毒颗粒,可显示病毒形态及形态发生过程。第97页,共105页，星期六，2024年，5月负染色法敏感性低,通过富集病毒的办法使样品含有高浓度病毒颗粒(106~107/ml),经磷钨酸负染后直接用于电镜检查,可显示病毒的结构。这种方法可有助于诊断难以在细胞培养中增殖的病毒,例如从病人粪便标本中观察是否有轮状病毒的感染。第98页,共105页，星期六，2024年，5月3、免疫电镜技术术(immuneelectronmicroscopy,IEM)是将抗原抗体反应的特异性与电子显微镜的高分辨力相结合,在亚细胞和超微结构水平上对抗原物质进行定位分析的一种高度精确、灵敏的方法。特异性抗体用电子致密物质,如铁蛋白、胶体金等标记后,使之与抗原结合,在电镜下观察到标记物所在位置,即为抗原抗体反应的部位。第99页,共105页，星期六，2024年，5月在难以分辨病毒颗粒与其外周伴随的结构的情况下,若将病毒样品制成悬液,加入特异性抗体,可使样品中的病毒颗粒凝集成团,再用电镜观察可提高病毒的检出率。利用这种方法从痘病毒、疱疹病毒感染的疱疹液中,以及疑为轮状病毒感染的粪便或HBV感染者血清中均可快速检出典型的病毒颗粒,能帮助早期诊断。第100页,共105页，星期六，2024年，5月(二)病毒蛋白抗原检查用荧光素、放射性同位素、过氧化物酶等标记抗体，采用免疫学和分子生物学技术，检测标本中的病毒蛋白抗原，具有敏感、特异、快速等优点。1.免疫荧光技术(immuno-fluorescence,IF)2.固相放射免疫测定(solid-phaseradioimmunoassay,SPRIA)3.酶免疫技术(enzymeimmunoassay,EIA)此法可检测多种病毒及其抗体，主要是酶免疫组化法和酶联免疫吸附试验法(ELISA)。第101页,共105页，星期六，2024年，5月(三)特异性IgM抗体的检测检测病毒特异性IgM抗体可诊断急性感染，特别是对证实孕妇感染风疹病毒尤为重要，但应注意类风湿因子(IgM)的干扰。另外，检测早期抗原的抗体是快速诊断的另一途径。如检测针对EBV的早期抗原(EA)、核心抗原(EANA)和衣壳抗原(VCA)等的抗体，可以区别急性或慢性EBV感染。此外，分子生物学检测技术、气相色谱技术等，均可用来分析和鉴定病毒感染。第102页,共105页，星期六，2024年，5月(四)检测病毒核酸1.核酸杂交技术用于病毒检测的有斑点杂交、细胞内原位杂交、DNA印迹杂交、RNA印迹杂交等。2.核酸扩增法目前多数病毒基因已通过分子克隆技术被明确了核苷酸序列，使得DNA扩增技术逐步发展为常规诊断技术之一。3.基因芯片技术第103页,共105页，星期六，2024年，5月基因芯片又称DNA芯片、生物芯片（biochip）。其原理是：将已知的生物分子探针或基因探针，大规模或有序排布于小块硅片等载体上，与待测样品中的生物分子或基因序列相互作用和并行反应，在激光的激发下，产生的荧光谱信号被接受器收集，计算机自动分析处理数据并报告结果。其优点是：可以一次性完成大量样品DNA序列的检测和分析，解决了传统核酸杂交技术的许多不足。芯片技术在病毒等微生物学诊断和流行病学调查方面有着广阔的应用前景。第104页,共105页，星期六，2024年，5月感谢大家观看第105页,共105页，星期六，2024年，5月**除对病毒做分离与鉴定外,检测病毒的方法可分为3类:一是病毒感染性的检测,即感染单位的测定.二是病毒的血清学检测,基于宿主对病毒抗原与所产生的相应抗体的特异性免疫应答。可用已知特异性抗体检测感染细胞或组织中的病毒蛋白,也可检测宿主体内对病毒感染所产生的特异性抗体。三是病毒的分子检测与诊断,可以检测感染细胞或组织中的具有特定序列的病毒核酸片段.本章仅对常用的病毒检测技术做一概述,其方法的细节可参见相关书籍。******实验动物对病毒学的贡献是巨大的。动物是最早用于病毒学研究的实验技术,尽管在病毒分离鉴定方面被